本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標板預(yù)先包被人前病毒整合位點1特異性捕獲抗體。待測樣本中的Pim1蛋白與固相捕獲抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入酶標記檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物，再次洗滌干凈后加入顯色底物進行反應(yīng)，終止顯色后檢測吸光度，根據(jù)標準曲線對應(yīng)的濃度梯度，定量計算樣本中Pim1蛋白的表達含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測 0.085ng/mL

檢測范圍：0.25ng/mL～16ng/mL

反應(yīng)時間：加樣孵育 66min，酶結(jié)合物 51min，避光顯色 18.5min

保存條件：整套試劑 2～8℃；標準品干粉溶解后分裝 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融

顯色系統(tǒng)：一體式預(yù)制 TMB 顯色工作液

檢測波長：450nm/650nm 雙波長

標準曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合，剔除異常值后生成標準曲線

注意事項：操作過程微孔板避免強光直射，防止底物提前氧化變色
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫放置 30min，稀釋濃縮洗滌液；固定酶標板，標注標準孔、樣本孔、空白孔。

標準孔加入梯度 Pim1 標準品 50μL，待測孔加入稀釋樣本 50μL，空白孔無試劑添加。

每孔加入一步法酶標記一抗工作液 100μL，封板輕微震蕩混勻。

37℃避光孵育 60min，穩(wěn)定環(huán)境溫度。

洗板 5 次，每次洗滌液浸泡 30s，甩出液體后拍干板條。

依次加入顯色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃顯色 14min。

終止液終止顯色，酶標儀 450nm 測吸光度，繪制標準曲線計算 Pim1 含量。