本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA檢測原理,酶標板微孔包被抗人切除修復(fù)交叉互補基因1蛋白特異性抗體。樣本中的ERCC1蛋白與固相抗體特異性結(jié)合,孵育洗滌后加入辣根過氧化物酶標記二抗,形成免疫復(fù)合物,后續(xù)經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng),檢測吸光度數(shù)值,結(jié)合標準曲線可定量檢測樣本中ERCC1蛋白的表達水平。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 人切除修復(fù)交叉互補基因1(ERCC1)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E2940 |
英文名稱 | ERCC1 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最小檢出 0.065ng/mL
檢測范圍:0.2ng/mL~12.8ng/mL
反應(yīng)時間:加樣孵育 61min,二抗孵育 49min,避光顯色 16.5min
保存條件:2~8℃冷藏;標準品溶解后一次性使用,不可回收留存
顯色系統(tǒng):HRP-TMB 一步顯色體系
檢測波長:450nm 主波長,620nm 參比
標準曲線繪制:四參數(shù) Logistic 擬合,自動扣除空白孔本底
注意事項:核酸蛋白樣本避免核酸酶污染,防止靶蛋白結(jié)構(gòu)破壞影響結(jié)合
關(guān)鍵注意事項:
實驗前需仔細閱讀對應(yīng)試劑盒的說明書,不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存,未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度(通常2-8℃或-20℃)
避免試劑污染,不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋,防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光,避免陽光直射影響結(jié)果
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實驗操作流程:
試劑室溫復(fù)溫 30min,稀釋濃縮洗滌液;固定酶標板框架,區(qū)分三組孔位。
標準品孔上樣梯度稀釋 ERCC1 標準品 50μL,樣本孔加入預(yù)處理待測樣本 50μL,空白孔無添加。
加樣孔加入一步法酶標記檢測抗體 100μL,封板輕晃混勻孔內(nèi)體系。
37℃避光孵育 64min,穩(wěn)定溫度環(huán)境。
洗板 5 次,每次洗滌液浸泡 34s,甩干后吸水紙徹底拍干。
依次加入顯色底物 A、B 各 50μL,避光 37℃顯色 18min。
加入終止液終止反應(yīng),450nm 檢測 OD 值,擬合標準曲線定量 ERCC1 蛋白含量。
關(guān)鍵字: 人切除修復(fù)交叉互補基因1;ERCC1;ELISA試劑盒;
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