本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標板微孔包被抗人缺血修飾白蛋白特異性抗體。檢測過程中，樣本中的IMA與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入辣根過氧化物酶標記檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后測定吸光度，吸光度與IMA含量正相關(guān)，通過標準曲線完成定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最小可測 2.5U/mL

檢測范圍：7U/mL～448U/mL

反應(yīng)時間：37℃結(jié)合孵育 53min，酶標二抗 46min，避光顯色 13.5min

保存條件：2～8℃儲存，白蛋白類標準品不可反復(fù)凍融，建議分裝保存

顯色系統(tǒng)：1:1 混合 A、B 底物液顯色

檢測波長：450nm 主波長，630nm 參比

標準曲線繪制：四參數(shù)競爭法擬合標準曲線

注意事項：溶血樣本白蛋白結(jié)構(gòu)改變，會造成 IMA 結(jié)果假性升高，嚴禁使用溶血血清
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

全部試劑室溫平衡 30min，稀釋濃縮洗滌液；按需拆分酶標板條，標注孔組信息。

標準孔加入倍比稀釋 IMA 標準品 50μL，待測孔加入稀釋血清樣本 50μL，空白孔不加試劑。

非空白孔加入一步法酶聯(lián)檢測抗體工作液 100μL，密封封板膜。

37℃避光孵育 62min，靜置孵育不移動板子。

洗板 4 次，每次洗滌液浸泡 38s，甩干后吸水紙吸干孔內(nèi)殘液。

每孔依次加入顯色 A、B 液各 50μL，避光 37℃顯色 16min。

滴加終止液終止反應(yīng)，酶標儀 450nm 檢測 OD 值，計算缺血修飾白蛋白含量。