本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理,微孔板預(yù)固定SK特異性捕獲抗體,樣本中的人鏈激酶與抗體特異性結(jié)合,加入HRP標記的SK檢測抗體構(gòu)建夾心復(fù)合物,洗滌去除游離組分后進行底物顯色,吸光度與SK濃度呈線性正相關(guān),借助標準曲線實現(xiàn)SK的定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 人鏈激酶(SK)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E3001 |
英文名稱 | SK Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:≤0.09IU/mL
檢測范圍:0.3IU/mL–20IU/mL
反應(yīng)時間:37℃分步孵育總時長 140min
保存條件:2–8℃冷藏,酶標記物不可反復(fù)凍融
顯色系統(tǒng):單組份 TMB 顯色
檢測波長:450/630nm
標準曲線繪制:四參數(shù)回歸法繪制標準曲線
注意事項:溶栓治療后采血樣本避免凝血因子降解影響結(jié)果
實驗前準備工作:
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標簽標注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品,單獨標記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標儀(450nm 主波長,630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(或手動洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記:空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標準品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
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實驗操作流程:
樣本稀釋:血漿樣本按說明書比例稀釋,充分吹打混勻;
微孔加樣:酶標板各孔添加梯度標準品、待測樣本 100μL;
同步免疫孵育:直接加入酶標記檢測液,覆膜 37℃孵育 54min;
洗滌微孔:倒掉孔內(nèi)液體,洗滌液浸泡 26s,拍干,洗板 4 次;
顯色反應(yīng):加入 TMB 顯色液避光 13min;
終止操作:加入終止液混勻板面液體;
濃度測算:酶標儀 450nm 測 OD 值,計算鏈激酶 SK 濃度。
關(guān)鍵字: 人鏈激酶;SK;ELISA試劑盒;
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