本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板微孔包被抗人上皮細胞粘附分子(CD362)特異性抗體。樣本中的Ep-CAM抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記檢測抗體形成免疫復(fù)合物，經(jīng)顯色、終止反應(yīng)后測定吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量樣本中該粘附分子的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出 0.087ng/mL

檢測范圍：0.28ng/mL～17.92ng/mL

反應(yīng)時間：室溫孵育 69min，37℃二抗 58min，避光顯色 20.8min

保存條件：2～8℃避光密封，標(biāo)準(zhǔn)品干粉溶解后分裝凍存可延長使用周期

顯色系統(tǒng)：一體式預(yù)制 TMB 顯色體系

檢測波長：450nm 主波長，620nm 參比

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五點梯度多項式回歸生成標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：腫瘤組織勻漿樣本充分去除組織殘渣，避免堵孔造成 OD 值異常偏高
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫復(fù)溫 35min，稀釋濃縮洗滌液；按需拆板標(biāo)注各類孔位。

梯度 Ep-CAM 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL 加入標(biāo)準(zhǔn)孔，稀釋后待測樣本 50μL 加入樣本孔，空白孔留空不加樣。

非空白孔加入一步法酶標(biāo)記一抗工作液 100μL，密封封板膜。

37℃恒溫避光孵育 72min，細胞粘附分子大分子適配長時孵育。

洗板 5 次，每次洗滌液浸泡 40s，甩出液體后徹底拍干孔內(nèi)殘留液體。

每孔添加顯色底物 A、B 各 50μL，避光 37℃顯色 19min。

滴加終止液終止反應(yīng)，10min 內(nèi) 450nm 讀取 OD 值，計算 Ep-CAM 蛋白濃度。