本試劑盒以雙抗體夾心ELISA法為核心檢測原理,微孔板固相載體包被人NCAM-L1/CD171特異性抗體,實驗過程中,樣本及標(biāo)準(zhǔn)品中的NCAM-L1抗原與固相抗體發(fā)生特異性結(jié)合,孵育結(jié)束洗滌后,加入對應(yīng)的酶標(biāo)記二抗結(jié)合抗原,形成固相免疫復(fù)合物,去除未結(jié)合組分后加入顯色底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng),終止反應(yīng)后測定吸光度,樣本吸光度值與NCAM-L1/CD171含量呈線性正相關(guān),據(jù)此可定量分析樣本中該靶標(biāo)的濃度。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 人神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E051 |
英文名稱 | NCAM-L1 Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最小檢出值 0.32ng/mL
檢測范圍:2ng/mL ~ 850ng/mL
反應(yīng)時間:固相結(jié)合孵育 80min,二抗溫育 55min,底物顯色 15min,合計 2h30min
保存條件:未開啟 2-8℃避光;已拆板條放入密封袋加干燥劑 2~8℃,濃縮洗滌液室溫存放即可
顯色系統(tǒng):單瓶即用型 TMB 顯色液,1N 硫酸終止
檢測波長:僅 450nm 波長讀取吸光度
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:半對數(shù)坐標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,7 個標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度
注意事項:細(xì)胞上清樣本需過濾去除細(xì)胞殘渣;所有稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用,不可隔夜留存
儲存與有效期:
未開封整套試劑盒:2~8℃避光冷藏,禁止冷凍;有效期 12 個月。
開封后保存
剩余酶標(biāo)板條:自封袋密封,內(nèi)置干燥劑 2~8℃避光;1 個月內(nèi)用完。
HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物:避光 2~8℃,避免光照失效。
濃縮洗滌液:2~30℃常溫保存,結(jié)晶溫水溶解不影響效果。
復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品:分裝 - 20℃凍存,避免反復(fù)凍融,1 個月內(nèi)使用。
過期試劑禁止使用。
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實驗操作流程:
試劑盒試劑室溫平衡 20min,稀釋濃縮洗滌液,逐級稀釋 NCAM-L1 標(biāo)準(zhǔn)品,劃分空白、標(biāo)品、樣本三類孔位。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)液;樣本孔添加 50μL 稀釋緩沖液后再加 10μL 待測樣本;空白孔不加試劑。
除空白孔外每孔加入酶標(biāo)記 NCAM-L1 一抗工作液 100μL,封板后 37℃孵育 65min。
棄凈孔內(nèi)液體,洗滌液加滿每孔,靜置 30s 甩干,連續(xù)洗板 5 次,徹底拍干微孔板。
每孔加入顯色液 A、B 各 50μL,混勻后 37℃避光顯色 16min。
加入 50μL 終止液終止反應(yīng),混勻微孔板。
酶標(biāo)儀 450nm 測 OD 值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣本 NCAM-L1 含量。
關(guān)鍵字: 人神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1;NCAM-L1/CD171;ELISA試劑盒;
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