本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術原理，酶標板微孔預先包被抗人神經(jīng)保護因子特異性抗體。檢測時，樣本中的CVNPF抗原與固相抗體特異性結合，孵育洗滌后加入酶標記配對抗體，形成穩(wěn)定的夾心免疫復合物，經(jīng)底物顯色、終止反應后檢測吸光度，通過標準曲線定量檢測樣本中神經(jīng)保護因子的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出限 1.9pg/mL

檢測范圍：5.6pg/mL～358.4pg/mL

反應時間：37℃孵育 76min，酶標二抗 63min，顯色 23.2min

保存條件：神經(jīng)肽類試劑全程 2～8℃避光，避免光照導致肽鏈斷裂失活

顯色系統(tǒng)：A、B 液 1:1 混合配制顯色液

檢測波長：450nm 單波長測定

標準曲線繪制：夾心 ELISA 四參數(shù)非線性擬合標準曲線

注意事項：腦脊液樣本冰上轉運，離體后室溫放置不可超過 20 分鐘
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒液體試劑室溫平衡 30min，配制洗滌工作液；固定酶標板框架區(qū)分孔組。

標準品孔加入倍比稀釋 CVNPF 標準品 50μL，樣本孔加入預處理待測樣本 50μL，空白孔不加試劑。

各檢測孔加入一步法酶結合抗體工作液 100μL，封板封口混勻體系。

37℃避光孵育 60min，神經(jīng)多肽類常規(guī)一步法孵育時長。

棄液洗板 4 次，每次洗滌液浸泡 36s，吸水紙吸干孔底殘液。

每孔加入顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 13min。

加入終止液 50μL，酶標儀 450nm 讀數(shù)，定量神經(jīng)保護因子含量。