本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測原理，微孔板預(yù)先包被人嗜酸性白血球相關(guān)RNA水解酵素家族成員2(EAR2)特異性抗體，加入樣本與標(biāo)準(zhǔn)品后，EAR2抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌純化體系后加入酶標(biāo)記二抗，形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，酶促顯色終止后檢測吸光度，吸光度與樣本中EAR2含量成正比，可實(shí)現(xiàn)定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員2(EAR2)ELISA試劑盒
英文名稱：eosinophil-associated ribonuclease A family member 2 Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E901
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 4.5pg/mL
檢測范圍：26pg/mL ~ 1050pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 67min，二抗結(jié)合 53min，避光顯色 21min，總用時(shí) 2h21min
保存條件：2～8℃儲(chǔ)存全套試劑，濃縮洗滌液室溫放置即可，無需低溫保存
顯色系統(tǒng)：預(yù)裝 TMB 顯色液，2mol/L 硫酸終止變色
檢測波長：450nm+620nm 雙波長讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：半對數(shù)線性擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，6 個(gè)濃度梯度
注意事項(xiàng)：支氣管肺泡灌洗液樣本需過濾除菌后檢測；加樣槍頭一次性更換，防止交叉污染
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒全部試劑室溫平衡 33min，稀釋洗滌緩沖液，逐級配制 EAR2 標(biāo)準(zhǔn)品梯度液，準(zhǔn)備酶標(biāo)板。
標(biāo)準(zhǔn)孔加 50μL 不同濃度 EAR2 標(biāo)準(zhǔn)溶液；待測孔加 44μL 稀釋液 + 16μL 待測樣本；空白孔不加液體。
除空白孔外每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體工作液 100μL，封板 37℃孵育 71min。
棄液洗板，洗滌液加滿每孔靜置 38s，甩干重復(fù) 6 次，拍干微孔板殘液。
每孔加入顯色 A、B 液各 50μL，輕微震蕩，37℃避光顯色 19min。
每孔加注終止液 50μL 混勻終止反應(yīng)。
450nm 讀取吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 EAR2 含量。
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關(guān)鍵字： 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成;EAR2;ELISA試劑盒;
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