本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理,微孔板固相包被人輸血傳播病毒(TTV)特異性抗原,加入待測(cè)樣本后,樣本中的TTV抗體與固相抗原特異性結(jié)合,孵育洗滌去除游離雜質(zhì)后,加入酶標(biāo)記抗人IgG抗體,形成抗原-樣本抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物,底物顯色終止后檢測(cè)吸光度,吸光度值與樣本中TTV抗體含量呈正相關(guān),可判定樣本TTV感染情況并定量檢測(cè)抗體濃度。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒((TTV)ELISA試劑盒
英文名稱:TTV Elisa Kit
貨號(hào):Y-E620
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低可檢出 TTV 核酸蛋白濃度 9.3pg/mL
檢測(cè)范圍:55pg/mL ~ 2200pg/mL
反應(yīng)時(shí)間:樣本孵育 100min,酶二抗 70min,避光顯色 28min,總時(shí)長(zhǎng) 3h18min
保存條件:試劑盒 2~8℃避光,所有生物類試劑避免反復(fù)凍融,標(biāo)準(zhǔn)品一次性復(fù)溶使用
顯色系統(tǒng):雙組份 TMB 顯色體系,強(qiáng)酸終止液終止
檢測(cè)波長(zhǎng):450nm 主波長(zhǎng),620nm 參比波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋做標(biāo)準(zhǔn)曲線,6 個(gè)梯度點(diǎn)線性擬合
注意事項(xiàng):血清樣本必須滅活處理;操作全程遵守生物安全二級(jí)防護(hù)要求
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋(常見(jiàn) 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說(shuō)明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品,單獨(dú)標(biāo)記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀(450nm 主波長(zhǎng),630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染,移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記:空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
實(shí)驗(yàn)步驟如下:

全部組分室溫平衡 34min,稀釋洗滌緩沖液,逐級(jí)稀釋 TTV 陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品,規(guī)劃酶標(biāo)板孔位。
標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔加入 50μL 梯度陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)液;待測(cè)樣本孔加 47μL 稀釋液 + 13μL 待測(cè)血清樣本;空白孔不加液體。
除空白孔外每孔加入 HRP 標(biāo)記 TTV 抗原抗體復(fù)合物工作液 100μL,封板 37℃孵育 72min。
棄液洗板,洗滌液注滿每孔靜置 40s,甩干重復(fù) 6 次,徹底拍干微孔板。
顯色 A、B 液各 50μL 加入每孔,輕微震蕩,避光顯色 20min。
每孔加注終止液 50μL 混勻終止顯色。
450nm 讀取 OD 值,對(duì)照臨界閾值判定 TTV 陽(yáng)性陰性并定量。
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關(guān)鍵字: 人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒;TTV;ELISA試劑盒;
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