本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，固相微孔板包被人絲裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)特異性抗體，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的MKK6抗原與固相抗體精準(zhǔn)結(jié)合，孵育洗滌后加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后測(cè)定吸光度，數(shù)值與樣本中MKK6蛋白濃度成正比，依托標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人絲裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA試劑盒
英文名稱：MKK6 Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E912
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 2.9pg/mL
檢測(cè)范圍：17pg/mL ~ 790pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：室溫孵育 80min，二抗孵育 52min，底物顯色 19min，總時(shí)長(zhǎng) 2h31min
保存條件：試劑盒 2-8℃避光存放，底物液不可暴露于日光，洗滌液可常溫存放
顯色系統(tǒng)：預(yù)裝 TMB 顯色液，2mol/L H?SO?終止反應(yīng)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：半對(duì)數(shù)坐標(biāo)擬合，7 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度
注意事項(xiàng)：檢測(cè)磷酸化 MKK6 需添加磷酸酶抑制劑；細(xì)胞樣本冰上裂解防止蛋白修飾降解
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū)，不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲(chǔ)存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開(kāi)使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果
顯色過(guò)程需避光，避免陽(yáng)光直射影響結(jié)果
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒試劑室溫放置 22min，配制洗滌工作液，倍比稀釋 MKK6 標(biāo)準(zhǔn)品，規(guī)劃酶標(biāo)板孔位。
標(biāo)準(zhǔn)品孔添加 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)品；樣本孔加 50μL 稀釋液 + 10μL 待測(cè)樣本；空白孔空置。
非空白孔加入酶結(jié)合抗 MKK6 抗體 100μL，封板膜密封，37℃孵育 55min。
撕膜棄液，洗滌液加滿每孔靜置 31s，甩干洗板 5 次，拍干微孔板殘留液體。
顯色雙液各 50μL 每孔添加，震蕩混勻，避光顯色 12min。
滴加終止液 50μL 混勻終止顯色反應(yīng)。
450nm 波長(zhǎng)檢測(cè) OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 MKK6 濃度。
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關(guān)鍵字： 人絲裂原活化蛋白激酶激酶6;MKK6;ELISA試劑盒;
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