本試劑盒依托經(jīng)典雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，酶標(biāo)板固相化抗人CP/CER特異性抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本后，樣本中的銅藍(lán)蛋白與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除雜質(zhì)后加入HRP標(biāo)記二抗構(gòu)建免疫復(fù)合物，洗板后加入顯色底物進(jìn)行酶促顯色，終止反應(yīng)后測定吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)定量樣本中人銅藍(lán)蛋白的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒
英文名稱：CP/CER ELISA Kit
貨號：Y-E2553
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：≤0.1mg/L
檢測范圍：0.5～120mg/L
反應(yīng)時間：樣本溫育 70min，酶抗體 42min，底物顯色 21min
保存條件：整套試劑盒 2～8℃避光，不可倒置存放包被板
顯色系統(tǒng)：單組分 TMB 顯色液，硫酸終止
檢測波長：450nm 讀取 OD 值
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：5 個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)線性擬合，外推計(jì)算高濃度樣本
注意事項(xiàng)：重金屬污染耗材會干擾銅藍(lán)蛋白結(jié)合，容器需無銅離子殘留
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫靜置 30min，CP 包被微孔板棄保護(hù)液，洗滌緩沖液洗板 2 次，吸水紙拍干微孔。
設(shè)置空白對照孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、血清樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 CP 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入稀釋血清樣本 50μL，空白孔補(bǔ)稀釋液。
每孔加入酶結(jié)合抗體工作液 50μL，覆膜封板，37℃孵育 58min。
倒掉廢液，洗板液加滿每孔靜置 30s 丟棄，連續(xù)洗板 5 次，徹底拍干。
每孔加入顯色底物液 100μL，室溫避光顯色 15min。
加入終止液 50μL 終止酶促反應(yīng)，輕搖混勻。
酶標(biāo)儀 450nm 測 OD 值，定量檢測銅藍(lán)蛋白含量。
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關(guān)鍵字： 人銅藍(lán)蛋白;CP/CER;ELISA試劑盒;
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