本試劑盒采用特異性抗原抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被人HAase特異性抗體，待測樣本中的透明質(zhì)酸酶與固相抗體特異性結(jié)合，孵育結(jié)束后洗除未結(jié)合的雜物質(zhì)，加入酶標(biāo)記二抗形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，經(jīng)二次洗滌純化體系，加入底物顯色，顯色強(qiáng)度與樣本中HAase含量成正比，通過吸光度檢測與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，完成透明質(zhì)酸酶的定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人透明質(zhì)酸酶(HAase)ELISA試劑盒
英文名稱：HAase Elisa Kit
貨號：Y-E995
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 0.09U/mL
檢測范圍：0.2～35U/mL
反應(yīng)時間：室溫孵育樣本 90min，二抗 58min，顯色 18min
保存條件：試劑盒 2～8℃，稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品當(dāng)日用完丟棄
顯色系統(tǒng)：雙組份顯色基質(zhì)混合使用
檢測波長：450nm+600nm 雙波長校正
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：剔除極值后非線性擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意事項(xiàng)：操作溫度穩(wěn)定在 20～25℃，溫度波動影響酶促顯色速率
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強(qiáng)光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實(shí)驗(yàn)廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運(yùn)輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫回溫 35min，HAase 捕獲抗體包被板去除孔內(nèi)液體，洗板 1 次后拍干微孔。
規(guī)劃孔位：空白、標(biāo)準(zhǔn)品、組織樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度 HAase 標(biāo)準(zhǔn)品 60μL，樣本孔加入上清稀釋液 60μL，空白孔添加稀釋緩沖液。
每孔加入 HRP 標(biāo)記二抗 60μL，封板密封，37℃濕盒孵育 72min。
去除封板膜，傾倒孔內(nèi)廢液，洗滌液浸泡每孔 40s 棄液，洗板 6 次，倒置用力拍干。
配制顯色工作液每孔加 100μL，37℃避光顯色 14min。
每孔加注終止液 50μL，混勻終止顯色反應(yīng)。
450nm 波長讀數(shù)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計算透明質(zhì)酸酶活性對應(yīng)蛋白含量。
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關(guān)鍵字： 人透明質(zhì)酸酶;HAase;ELISA試劑盒;
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