本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA原理，微孔板預(yù)包被HSPG特異性抗體，樣本中的人硫酸肝素糖蛋白與固相抗體特異性結(jié)合，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成免疫夾心復(fù)合物，洗滌后進(jìn)行酶促顯色反應(yīng)，吸光度值與HSPG濃度呈正相關(guān)，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測(cè)。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E2805 |
英文名稱 | HSPG ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：≤0.06ng/mL
檢測(cè)范圍：0.2ng/mL–15ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：濕盒孵育合計(jì) 148min
保存條件：微孔板密封防潮 2–8℃，其余試劑常規(guī)冷藏
顯色系統(tǒng)：TMB 雙組分顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6 梯度標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意事項(xiàng)：組織基質(zhì)樣本高鹽稀釋會(huì)破壞抗原抗體結(jié)合，稀釋液使用試劑盒配套緩沖液
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
樣本處理：組織勻漿上清離心取澄清液，稀釋混勻；
板條加樣：預(yù)包被板每孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本 100μL；
一步共孵：直接添加酶標(biāo)二抗，封板 37℃孵育 61min；
洗板步驟：洗滌液浸泡 29s，拍干，洗板 5 次；
底物顯色：避光顯色 14min；
終止顯色：加入終止液輕搖酶板；
定量檢測(cè)：酶標(biāo)儀 450nm 測(cè) OD 值，計(jì)算 HSPG 含量。
關(guān)鍵字： 人硫酸肝素糖蛋白;HSPG;ELISA試劑盒;
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