本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗雙抗體夾心法原理，預(yù)先將特異性ATM抗體包被于酶標(biāo)板微孔中，加入待測樣本、標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本中的ATM抗原會與包被抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)記二抗形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過充分洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)，加入底物液進行顯色反應(yīng)，最后通過終止液終止反應(yīng)，利用酶標(biāo)儀測定各孔吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計算樣本中ATM的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變基因(ATM)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E2661 |
英文名稱 | ATM ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢出量＜1.2 pg/mL
檢測范圍：2.5pg/mL～80pg/mL
反應(yīng)時間：樣本孵育 60min，酶結(jié)合物孵育 30min，顯色 15min，總耗時 105min
保存條件：試劑盒整體 2～8℃避光密封保存，標(biāo)準(zhǔn)品分裝后 - 20℃凍存避免反復(fù)凍融
顯色系統(tǒng)：TMB 單組份顯色液，終止液為 2M 硫酸溶液
檢測波長：主波長 450nm，參比波長 630nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：設(shè)置 7 個梯度標(biāo)準(zhǔn)品濃度，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù) Logistic 擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意事項：全程避免核酸酶污染，加樣槍頭一次性使用，孵育階段嚴(yán)禁孔板風(fēng)干
儲存與有效期：
未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個月。
開封后保存
剩余酶標(biāo)板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個月內(nèi)用完。
HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。
復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品：分裝 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融，1 個月內(nèi)使用。
過期試劑禁止使用。
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實驗操作流程：
樣本稀釋：按試劑盒說明書配比稀釋待測血清 / 組織勻漿樣本，充分渦旋混勻，室溫靜置 5min 備用；同時配制梯度濃度 ATM 標(biāo)準(zhǔn)品系列溶液。
板孔加樣：包被板每孔依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本、空白對照液各 100μL，全程避免孔內(nèi)產(chǎn)生氣泡，記錄加樣排布表。
酶結(jié)合物添加：所有孔直接加入 HRP 標(biāo)記一抗工作液 100μL，封板膜密封酶標(biāo)板，輕輕震蕩混勻 30s。
恒溫孵育：將封好的酶標(biāo)板置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 60min，期間不可隨意挪動酶標(biāo)板。
洗板操作：撕去封板膜，棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌緩沖液，浸泡 30s 后拍干，重復(fù)洗板 5 次，孔內(nèi)無殘留水漬。
顯色反應(yīng)：每孔加入顯色底物 A 液、B 液各 50μL，避光室溫顯色 15min，肉眼觀察標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)清晰藍色梯度。
終止讀數(shù)：每孔快速加入終止液 50μL 終止酶促反應(yīng)，酶標(biāo)儀設(shè)置 450nm 波長測定各孔 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本 ATM 濃度。
關(guān)鍵字： 人毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變基因;ATM;ELISA試劑盒;
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