本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗特異性夾心檢測原理，將PWM特異性抗體包被于酶標板微孔，待測樣本、標準品中的美洲商陸素可與固相抗體特異性結合，隨后加入酶標記特異性抗體形成免疫夾心復合物，經(jīng)洗滌去除非特異性結合成分，加入顯色底物進行酶促顯色反應，反應終止后測定各孔OD值，根據(jù)標準曲線回歸方程，精準定量樣本中PWM的含量水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出濃度 2.1 ng/L

檢測范圍：8ng/L～450ng/L

反應時間：樣本 37℃孵育 80min，酶標試劑 50min，顯色 18min，總時長 148min

保存條件：試劑盒 2-8℃冷藏，濃縮標準品 - 20℃凍存，洗滌液可室溫放置 3 個月

顯色系統(tǒng)：單一 TMB 底物液，專用終止液終止

檢測波長：450nm 單波長測定吸光度

標準曲線繪制：7 個梯度點，坐標 OD - 濃度，直線擬合，R2 需大于 0.995 方可使用

注意事項：不可使用含疊氮鈉樣本，疊氮鈉會滅活 HRP 酶活性
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經(jīng)遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

工作液配制：濃縮洗滌液用純水稀釋備用，梯度配制 PWM 標準品稀釋體系，待測原液無需稀釋直接備用。

孔位加樣：酶標板各對應孔加入標準品、待測樣品、空白液 100μL，避免液體掛壁。

一步法酶抗添加：所有反應孔加入酶標記 PWM 抗體工作液 100μL，封板震蕩混勻。

孵育結合：37℃恒溫箱孵育 70min，保證抗原抗體復合物穩(wěn)定結合。

洗板去污：倒掉孔中液體，洗滌液浸泡每孔 35s，拍干，重復洗板 5 輪。

底物顯色：加入顯色混合液，避光顯色 16min，觀察梯度顯色差異。

終止測值：終止液終止反應，酶標儀 450nm 讀數(shù)，依據(jù)標準曲線計算樣本 PWM 濃度。