人血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)ELISA試劑盒(文獻引用產(chǎn)品)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
4. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
人血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)ELISA試劑盒(文獻引用產(chǎn)品)注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、20、40、80、160、320pg/ml
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
人血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)ELISA試劑盒(文獻引用產(chǎn)品)判斷
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
關鍵字: 人血管內皮生長因子受體2(VEGFR2);VEGFR2細胞;酶聯(lián)免疫法;一步夾心法;間接法;
上海雅吉生物科技的核心業(yè)務主要圍繞生命科學研究所需的各類試劑、細胞、抗體及技術服務展開,具體可歸納為以下幾個方面:
細胞產(chǎn)品與技術平臺:
細胞產(chǎn)品:提供包括正常細胞、腫瘤細胞、腫瘤耐藥細胞在內的多種細胞系。同時,公司也是美國ScienCell等品牌的原代細胞產(chǎn)品的代理商。
穩(wěn)轉細胞株構建服務:公司具備豐富的蛋白表達研究經(jīng)驗,能夠為客戶提供從基因序列到穩(wěn)定細胞株交付的一站式定制服務,應用于基因功能研究、藥物篩選和重組蛋白生產(chǎn)等領域。
科研試劑:這是公司的基礎和優(yōu)勢業(yè)務。產(chǎn)品線全面覆蓋了分子生物學、免疫學、細胞生物學和微生物學等多個學科。
ELISA試劑盒:提供人、大鼠、小鼠、犬、魚、雞、牛等多種物種以及植物的ELISA檢測試劑盒,在國內眾多重點實驗室中廣泛使用并被科研文獻引用。生化試劑、抗體與血清:提供包括一抗、二抗、單克隆/多克隆抗體在內的多種抗體產(chǎn)品,以及胎牛血清等細胞培養(yǎng)用血清。
蛋白研究相關試劑盒:提供超過300種針對不同樣本來源(動物、植物、微生物)和不同細胞器(如線粒體、外泌體)的蛋白提取及檢測試劑盒。