?產(chǎn)品名稱(chēng):阿留申病病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Aleutian Disease Virus(ADV)PCR
貨號(hào):YS-P013805
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
逆轉(zhuǎn)錄熒光 RT-PCR,針對(duì)阿留申病毒衣殼蛋白基因擴(kuò)增,貂組織、血清樣本直接檢測(cè)病毒 RNA,實(shí)時(shí)熒光定性定量。
常規(guī)一步法 RT-PCR,樣本裂解后無(wú)需單獨(dú)提 RNA,直接擴(kuò)增病毒靶片段,凝膠條帶判定水貂阿留申病感染。
內(nèi)參對(duì)照多重 RT-PCR,同步擴(kuò)增宿主管家基因與病毒基因,排除樣本 RNA 降解導(dǎo)致的陰性誤判。
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 樣本處理
提取待測(cè)樣本RNA,建議使用商品化RNA提取試劑盒。
2. 陽(yáng)性對(duì)照稀釋?zhuān)ㄊ纠?個(gè)梯度)
標(biāo)記離心管(7至2號(hào)),每管加入45μL模板稀釋液。
按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照,避免交叉污染。
3. PCR反應(yīng)體系配制(20μL/反應(yīng))
| 組分 | 體積(μL) |
| RT-PCR反應(yīng)液 | 10 |
| 熒光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 補(bǔ)至20 |
4. 上機(jī)程序
逆轉(zhuǎn)錄:50℃ 15分鐘(可選,根據(jù)病毒RNA特性調(diào)整)。
預(yù)變性:95℃ 2分鐘。
循環(huán):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào)),共40循環(huán)。
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注意事項(xiàng):
避免反復(fù)凍融試劑,解凍后需充分混勻。
實(shí)驗(yàn)環(huán)境需嚴(yán)格分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)),防止污染。
陽(yáng)性對(duì)照需與樣本分裝操作。
本產(chǎn)品僅限科研用途,不可用于臨床診斷。
操作時(shí)需穿戴防護(hù)裝備,避免試劑接觸皮膚或眼睛。
樣本采集需遵循無(wú)菌原則,運(yùn)輸時(shí)使用干冰或冰袋保存。
關(guān)鍵字: 阿留申病病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;
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