一、CBA流式多因子檢測原理介紹
CBA(Cytometric Bead Array)技術是基于包被抗體的微球并利用流式細胞儀同時對多種蛋白質進行定量分析的創(chuàng)新性技術。它是一系列不同熒光強度、各自包被不同捕獲抗體的微球，在同一反應中與少量樣本混合孵育來捕獲相應抗原，再與帶熒光標記的第二種抗體以雙抗夾心的結合方式，用流式細胞儀來檢測區(qū)別不同微球，再分析每個微球上的定量抗原的熒光素強度，根據(jù)已知濃度的標準蛋白和對應的熒光強度繪制標準曲線，來擬合計算未知樣本中的相應抗原濃度。
Cytometric Bead Array（CBA），即細胞因子微球檢測技術。是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數(shù)放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。 CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒——待測物復合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。
每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（Capture Antibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當微球和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細胞培養(yǎng)液）中相應的抗原或蛋白結合，然后加入熒光標記的檢測抗體，就會形成“三明治”夾心復合物。最后通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光，在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性；檢測抗體帶有PE熒光素標記，在流式細胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。
二、CBA技術特點
CBA是集ELISA和細胞流式技術優(yōu)點為一身的液相蛋白檢測技術。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品后，呈懸浮態(tài)，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、更準確。CBA主要的技術特點:
1、輕松實現(xiàn)多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。
2、樣本需要量小。僅需要50μL溶液就可進行一次檢測。
3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。
4、更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復性。CBA技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測范圍達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標準曲線。根據(jù)抗體的熒光強度對目的蛋白定量，排除了ELISA反應中酶聯(lián)放大產(chǎn)生的假陽性。
5、檢測對象的靈活組合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標，最多能同時檢測75個指標。除了擁有CBA kit的優(yōu)勢外，F(xiàn)lex Set還配有獨立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進一步豐富了CBA產(chǎn)品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等許多領域的蛋白定量分析。
6、操作簡單，省時省力。CBA技術采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。
7、強大的軟件分析系統(tǒng)。BD CBA軟件具有強大的數(shù)據(jù)處理能力，直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度；除了為用戶提供待測物的計數(shù)結果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統(tǒng)兩種版本供您選擇。和傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術相比，CBA技術是一種“多元”和“同步”的檢測技術。CBA應用：自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應用于他們的領域。CBA應用領域涉及眼淚、血清、唾液、細胞培養(yǎng)上清等樣本中細胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領域。革新的CBA技術與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有下列優(yōu)點：
檢測優(yōu)點：（與ELISA相比）
1、所需要的樣本量小：所有的指標同時檢測最多只需50ul樣本。
2、節(jié)省檢測時間和工作量：所有指標同時檢測只需一個流程，操作簡便，有自動分析軟件處理數(shù)據(jù)。
3、同時檢測的目的蛋白多，選擇自由度大：實際檢測中可同時自由組合30個指標，可將感興趣的指標都加進去。
每項實驗樣本用量50-200ul
樣本用量少于50ul
實驗時間大于24h
流式細胞儀自動檢測，標準曲線自動測定，專用軟件自動計算