人間質干細胞誘導成脂分化試劑盒

產品基本信息

產品簡介

人間質干細胞成脂誘導分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell^TM）自主研發(fā)的一款用于人間質干細胞誘導分化成脂的試劑盒，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質干細胞的誘導成脂分化。本產品僅限于科學研究，不能用于臨床診斷、治療，以及其他用途。

四、產品特性

l 誘導分化程序簡單便捷。

l 誘導成脂細胞效率高。

五、操作方法

1.         相關材料

?    Xeno-Free 人間充質干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?:AC-1001003）

?    人間充質干細胞成脂分化試劑盒（Applied Cell^?:AC-1001029）

?    成脂檢測染液（Applied Cell^?:AC-1001022）

?    細胞消化液（Applied Cell^?:AC-1001024）

?    磷酸鹽緩沖液(1×) （Applied Cell^?: Cat.AC-1001037）

2.         實驗準備

人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基的配制

2.1.     在 2-8℃解凍人間充質干細胞成脂分化添加劑，輕晃搖勻；

2.2.     隨后將添加劑加入到人間充質干細胞成脂分化基礎培養(yǎng)基中（10ml 添加劑與 90mL 基礎培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基。人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲放 2 周。

注意：人間充質干細胞脂肪維持添加劑只能在 2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑瓶 1-2 次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。

3.         實驗操作

誘導成脂（以 6 孔板為例）

3.1.     將傳代或復蘇凍存的人間充質干細胞接種到 6 孔板上，密度為 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2× 105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

3.2.     當人間充質干細胞融合度達到 80-90%時，開始誘導脂肪前體細胞分化。吸掉 Xeno-Free 人間充質干細胞培養(yǎng)基，每孔加 1ml 預熱 PBS 清洗一次，吸掉 PBS，加入 2 ml 人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基，以此記為第 0 天；

注意：人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基使用前需預熱至 37℃。

3.3.     每 1-2 天更換人間充質干細胞成脂分化培養(yǎng)基；

3.4.         第 5-6 天可以看到少量脂滴；

3.5.     第 9-14 天待脂肪滴顆粒成熟即可進行拍照，染色。（根據情況誘導時間可適當延長）

注意：①培養(yǎng)基每 1-2 天換液。由于隨著脂肪細胞的成熟，pH 的降低會觀察到培養(yǎng)基變黃。pH 從 7 降到 6.5，細胞增殖會變慢。pH 在 6.5 到 6 時，細胞活力會降低。所以誘導后期， 需要每天換液。

②換液時盡量不使培養(yǎng)基變干，培養(yǎng)基變干會降低細胞層對培養(yǎng)皿表面的粘附。

③細胞分化效果和供體有關。供體的年齡是一個因素。有研究發(fā)現與年長者相比，年輕供體來源    的細胞的分化能力更強。

4.         成脂檢測染液染色

4.1.     每 6ml 成脂染液加入 4ml 蒸餾水制成染色工作液，混勻室溫放置 5-10 分鐘。加入蒸餾水后，染液會有片狀結晶析出，可用直接使用或濾網過濾除掉結晶。

4.2.     脂肪誘導分化結束后，吸掉原有培養(yǎng)基，用 1×PBS 沖洗 1-2 次。每孔加入適量細胞固定液， 固定 20 min。

4.3.     吸掉細胞固定液，用 1×PBS 沖洗 2 次。，加入適量染色工作液，使染液完全覆蓋脂肪滴，室溫染色 15min。

4.4.     吸掉染色工作液，用 1×PBS 沖洗 2-3 次。

4.5.     將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察脂滴染色效果，拍照。

注意：染色后顯微鏡觀察，及時拍照。如果時間過長，脂肪滴會發(fā)生破裂。