巴斯德氏桿菌屬PCR試劑盒

Pasteurella spp. PCR Kit

產(chǎn)品及特點 

本產(chǎn)品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液，濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，可限度的減少人為誤差。使用時只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷，能避免PCR操作過程中的污染，使用時只需取適量2×TaqPCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去離子水補足體積，使MasterMix溶液濃度為1×即可進行反應。使用前請保證充分溶解并混勻，操作需在冰上進行。

Taq：擴增效率最高的耐熱 DNA 聚合酶，其擴增速度約為 1-2kb/min。擴增堿基出錯率為 10-5 左右。其產(chǎn)物未端帶有 A，可直接用于 TA 克隆。

Pfu：目前保真度最高的耐熱 DNA 聚合酶，堿基出錯率為 10-6，但擴增效率低于 Taq 酶， 一般能很好的擴增 2kb 以下的片段。其擴增速度約為 500bp/min 左右。其產(chǎn)物為平未端，須加 A后才可用于 TA 克隆。

Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集擴增效率高和保真度好于一身。擴增效率比 Pfu 高， 保真度比 Taq 好。其擴增速度約為 1000bp/min 左右。其產(chǎn)物未端帶有 A，可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反應完后可以直接電泳檢測。不含染料的 PCR MasterMix 反應完后 加入上樣緩沖液后電泳檢測。

它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增巴斯德氏桿菌屬，與其他微生物沒有交叉反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：樣品 DNA。

使用方法：

 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送20 次核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 補骨脂 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有預期條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。