利那洛肽概述理化性質作用機制藥效學藥代動力學用法及用量制備方法應用不良反應注意事項參考資料專題中文名稱:利那洛肽中文同義詞:利那洛肽原料;利那洛肽;利那洛肽,醋酸利那洛肽;醋酸利那洛肽851199-59-2;醋酸利那洛肽;利那洛肽-多肽原料委托生產(chǎn);利那洛肽-多肽制劑一致性評價;LINACLOTIDE利那洛肽英文名稱:Linaclotide英文同義詞:Linacllotide;Linaclotide;LinaelotideAcetate;Linaelotide;CY-14CAS號:851199-59-2分子式:C59H79N15O21S6分子量:1526.73646EINECS號:相關類別:生物制藥;多肽原料藥;醫(yī)藥中間體;多肽;醫(yī)藥原料藥;原料藥;Inhibitors;醫(yī)用原料Mol文件:851199-59-2.mol利那洛肽性質沸點2045.0±65.0°C(Predicted)密度1.60酸度系數(shù)(pKa)3.05±0.10(Predicted)利那洛肽用途與合成方法概述利那洛肽，又名醋酸利那洛肽，商品名為Linzess。是一種含有14個氨基酸的合成肽類結構，與內源性鳥苷肽家族相關，是FDA唯一批準的可用于臨床的腸道局部起效的GC-C（鳥苷酸環(huán)化酶-C）激動劑類藥物，可用于治療便秘型腸易激綜合征（IBS-C）和慢性特發(fā)性便秘（CIC）成年患者。理化性質白色至灰白色無定形粉末;微溶于水和氯化鈉水溶液(0.9%)。圖1為利那洛肽作用機制利那洛肽是一種鳥苷酸環(huán)化酶-C受體激動劑（GCCA），同時具有內臟鎮(zhèn)痛效應和內分泌活性。利那洛肽及其活性代謝產(chǎn)物都可以與小腸上皮管腔表面的鳥苷酸環(huán)化酶-C（GC-C）受體結合。在動物模型中，通過GC-C的活化，利那洛肽可以減輕內臟疼痛，提高胃腸道轉運速度，在人類中，該藥物也可以提高結腸的轉運速度。GC-C活化的結果即細胞內外cGMP（環(huán)鳥苷酸）濃度升高。細胞外cGMP可以降低疼痛神經(jīng)纖維的活性，可減輕模型動物的內臟疼痛。細胞內cGMP可通過激活CFTR（囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)因子），增加小腸腔內氯化物和碳酸氫鹽的分泌量，最終導致小腸液分泌增多和小腸轉運速度增快。藥效學雖然在臨床研究中尚未在人中完全評價LINZESS的藥理學效應，LINZESS曾顯示用Bristol糞便形成計分(BSFS)和增加糞便頻數(shù)測定大便的一致性變化。藥代動力學吸收：口服給藥后LINZESS吸收少生物利用度低?？诜┝?45μg或290μg給藥后利那洛肽及其活性代謝物的濃度血漿中低于定量低限。因此，不能計算標準藥代動力學參數(shù)例如曲線下面積(AUC)，最高濃度(Cmax)，和半衰期(t?)。分布：鑒于利那洛肽治療的口服劑量的血藥濃度，是無法衡量的，預計利那洛肽分布至組織很少。代謝：利那洛肽在胃腸道內通過丟失末端酪氨酸部分被代謝為其主要，活性代謝物。利那洛肽及其代謝物在小腸腔內被蛋白解降解為較小肽和天然存在氨基酸。消除：進食和空腹受試者每天給予290μg的LINZESS共7天后在糞樣品中回收活性肽平均約5%(空腹)和約3%(進食)和實際上所有為活性代謝物。食物影響：在一項交叉研究中，18例健康受試者在進食和非進食狀態(tài)給予LINZESS290μg共7天。血漿中沒有檢測到利那洛肽活其活性代謝物。在高脂肪早餐后立即服用LINZESS比空腹狀態(tài)服用導致松散便和排便頻數(shù)較高[見劑量和給藥方法(2.1，2.2)]。在臨床試驗中，在早餐前至少30分鐘空胃給予LINZESS。用法及用量該藥膠囊劑型，口服給藥，每日一次。它可以緩解IBS-C導致的疼痛和便秘癥狀，以及CIC患者的便秘及排便困難表現(xiàn)。藥物的推薦治療劑量為：便秘型腸易激綜合征患者290微克；慢性特發(fā)性便秘患者145微克。每日首次進餐30分鐘之前服用。制備方法半選擇性氧化形成三對二硫鍵合成利那洛肽利用Fmoc固相合成策略,Wang樹脂為載體合成了3條[4Trt＋2Acm]和3條[2Trt＋4Acm]利那洛肽的線性前體化合物,在裂解樹脂的同時脫去半胱氨酸上的Trt保護基,使用氯化血紅素催化氧化的方法形成部分二硫鍵.下一步反應,使用了二苯亞砜[PhS(O)Ph]/三甲基氯硅烷(CH3SiCl3)體系,在TFA中脫除Acm保護基并形成剩余的二硫鍵.合成的6條線性前體肽中,有3條可以較高轉化率得到利那洛肽,成功的將Acm保護的半胱氨酸應用于利那洛肽的合成中。（1）多肽的合成第1個氨基酸與樹脂的偶聯(lián)：稱取Wang樹脂（1g，0.72mmol/g）于25ml固相反應器中，用15mlCH2Cl2溶脹2h。稱取Fmoc-Tyr（tBu）（0.99g，2.16mmol）、HBTU（0.82g，2.16mmol）、HOBT（0.29g，2.16mmol）溶于15mlDMF中，加入DIEA（1.82ml，11.04mmol）活化后加入固相反應器中，在室溫下?lián)u床震蕩反應3h。加入乙酸酐∶吡啶∶DMF=2∶1∶3（V/V/V）（1×30min）進行封閉，依次用DMF（4×1min）、CH2Cl2（4×1min）、DMF（4×1min）洗滌樹脂。剩余氨基酸的偶聯(lián)：按照利那洛肽的氨基酸序列，重復上述步驟進行偶聯(lián)和脫Fmoc，每接完1個氨基酸以后，用Kasier試劑進行檢測，脯氨酸（Pro）用溴酚藍法檢測，顯色反應為陰性則進入下一個偶聯(lián)循環(huán)，否則重復偶聯(lián)步驟。多肽的裂解：完成偶聯(lián)后，稱取多肽樹脂放入反應瓶中，按照1g樹脂5ml裂解劑的比例配置裂解液，在氮氣保護下加入TFA∶水∶苯甲硫醚∶苯酚∶EDT=82.5∶5∶5∶5∶2.5（V/V/V/V/V）裂解2h后抽濾，加少量TFA和CH2Cl2洗滌3次，合并濾液，將得到的濾液用氮氣吹去3/4體積后，滴入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，離心得到相應的粗肽。（2）多肽的純化及分析將得到的粗肽溶于少量水,用Waters600半制備液相,XB-C18制備柱進行純化.高效液相條件,流動相A:水(含體積分數(shù)為0.1%的TFA);流動相B:乙腈(含體積分數(shù)為0.1%的TFA);流動相梯度:流動相B15%～50%(體積分數(shù)),20min;流速為3mL/min;檢測波長220nm.收集主峰,旋轉蒸發(fā)除去乙腈,凍干得到多肽純品。（3）二硫鍵的形成氯化血紅素催化氧化形成二硫鍵:稱取脫除Trt保護基的利那洛肽線性前體肽(3mg,2μmol),溶于pH＝8.0的Tris-HCl的緩沖溶液(5mL)中,加入20%(物質的量比)的氯化血紅素(含少量DIEA),室溫敞口攪拌2h,反應結束用HPLC分析.PhS(O)Ph/CH3SiCl3脫Acm保護基并形成二硫鍵:稱取多肽(0.6mg,0.4μmol),溶于TFA(0.4mL)中,加入CH3SiCl3(12μL,250equiv.),PhS(O)Ph(0.8mg,10equiv.),苯甲醚(4.3μL,100equiv.),室溫敞口攪拌20min加入干燥乙醚(10mL),4mol/L醋酸(5mL)震蕩,取水相進行HPLC分析并分離。