利那洛肽，又名醋酸利那洛肽，商品名為Linzess，是一種含有14個(gè)氨基酸的合成肽類結(jié)構(gòu)，與內(nèi)源性鳥苷肽家族相關(guān)，是FDA唯一批準(zhǔn)的可用于臨床的腸道局部起效的GC-C（鳥苷酸環(huán)化酶-C）激動(dòng)劑類藥物，可用于治療便秘型腸易激綜合征（IBS-C）和慢性特發(fā)性便秘（CIC）成年患者。

利那洛肽為白色至灰白色無定形粉末; 微溶于水和氯化鈉水溶液(0.9%) 。

利那洛肽是一種鳥苷酸環(huán)化酶-C受體激動(dòng)劑（GCCA），同時(shí)具有內(nèi)臟鎮(zhèn)痛效應(yīng)和內(nèi)分泌活性。利那洛肽及其活性代謝產(chǎn)物都可以與小腸上皮管腔表面的鳥苷酸環(huán)化酶-C（GC-C）受體結(jié)合。在動(dòng)物模型中，通過GC-C的活化，利那洛肽可以減輕內(nèi)臟疼痛，提高胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)速度，在人類中，該藥物也可以提高結(jié)腸的轉(zhuǎn)運(yùn)速度。GC-C活化的結(jié)果即細(xì)胞內(nèi)外cGMP（環(huán)鳥苷酸）濃度升高。細(xì)胞外cGMP可以降低疼痛神經(jīng)纖維的活性，可減輕模型動(dòng)物的內(nèi)臟疼痛。細(xì)胞內(nèi)cGMP可通過激活CFTR（囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子），增加小腸腔內(nèi)氯化物和碳酸氫鹽的分泌量，最終導(dǎo)致小腸液分泌增多和小腸轉(zhuǎn)運(yùn)速度增快。雖然在臨床研究中尚未在人中完全評(píng)價(jià)LINZESS的藥理學(xué)效應(yīng)，LINZESS曾顯示用Bristol糞便形成計(jì)分(BSFS)和增加糞便頻數(shù)測(cè)定大便的一致性變化。吸收：口服給藥后LINZESS吸收少生物利用度低?？诜┝?45 μg或290 μg給藥后利那洛肽及其活性代謝物的濃度血漿中低于定量低限。因此，不能計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)例如曲線下面積(AUC)，最高濃度(Cmax)，和半衰期(t?)。
分布：鑒于利那洛肽治療的口服劑量的血藥濃度，是無法衡量的，預(yù)計(jì)利那洛肽分布至組織很少。
代謝：利那洛肽在胃腸道內(nèi)通過丟失末端酪氨酸部分被代謝為其主要，活性代謝物。利那洛肽及其代謝物在小腸腔內(nèi)被蛋白解降解為較小肽和天然存在氨基酸。
消除：進(jìn)食和空腹受試者每天給予290 μg的LINZESS共7天后在糞樣品中回收活性肽平均約5% (空腹)和約3% (進(jìn)食)和實(shí)際上所有為活性代謝物。
食物影響：在一項(xiàng)交叉研究中，18例健康受試者在進(jìn)食和非進(jìn)食狀態(tài)給予LINZESS 290 μg共7天。血漿中沒有檢測(cè)到利那洛肽活其活性代謝物。在高脂肪早餐后立即服用LINZESS比空腹?fàn)顟B(tài)服用導(dǎo)致松散便和排便頻數(shù)較高 [見劑量和給藥方法(2.1，2.2)]。在臨床試驗(yàn)中，在早餐前至少30分鐘空胃給予LINZESS。該藥膠囊劑型，口服給藥，每日一次。它可以緩解IBS-C導(dǎo)致的疼痛和便秘癥狀，以及CIC患者的便秘及排便困難表現(xiàn)。
藥物的推薦治療劑量為：便秘型腸易激綜合征患者 290微克；慢性特發(fā)性便秘患者 145微克。每日首次進(jìn)餐30分鐘之前服用。半選擇性氧化形成三對(duì)二硫鍵合成利那洛肽利用Fmoc固相合成策略,Wang樹脂為載體合成了3條[4Trt＋2Acm]和3條[2Trt＋4Acm]利那洛肽的線性前體化合物,在裂解樹脂的同時(shí)脫去半胱氨酸上的Trt保護(hù)基,使用氯化血紅素催化氧化的方法形成部分二硫鍵.下一步反應(yīng),使用了二苯亞砜[PhS(O)Ph]/三甲基氯硅烷(CH3SiCl3)體系,在TFA中脫除Acm保護(hù)基并形成剩余的二硫鍵.合成的6條線性前體肽中,有3條可以較高轉(zhuǎn)化率得到利那洛肽,成功的將Acm保護(hù)的半胱氨酸應(yīng)用于利那洛肽的合成中。
（1）多肽的合成
第1個(gè)氨基酸與樹脂的偶聯(lián)：稱取Wang樹脂（1g，0.72mmol/g）于25ml固相反應(yīng)器中，用15mlCH2Cl2溶脹2h。稱取Fmoc-Tyr（tBu）（0.99g，2.16mmol）、HBTU（0.82g，2.16mmol）、HOBT（0.29g，2.16mmol）溶于15mlDMF中，加入DIEA（1.82ml，11.04mmol）活化后加入固相反應(yīng)器中，在室溫下?lián)u床震蕩反應(yīng)3h。加入乙酸酐∶吡啶∶DMF=2∶1∶3（V/V/V）（1×30min）進(jìn)行封閉，依次用DMF（4×1min）、CH2Cl2（4×1min）、DMF（4×1min）洗滌樹脂。
剩余氨基酸的偶聯(lián)：按照利那洛肽的氨基酸序列，重復(fù)上述步驟進(jìn)行偶聯(lián)和脫Fmoc，每接完1個(gè)氨基酸以后，用Kasier試劑進(jìn)行檢測(cè)，脯氨酸（Pro）用溴酚藍(lán)法檢測(cè)，顯色反應(yīng)為陰性則進(jìn)入下一個(gè)偶聯(lián)循環(huán)，否則重復(fù)偶聯(lián)步驟。
多肽的裂解：完成偶聯(lián)后，稱取多肽樹脂放入反應(yīng)瓶中，按照1g樹脂5ml裂解劑的比例配置裂解液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入TFA∶水∶苯甲硫醚∶苯酚∶EDT=82.5∶5∶5∶5∶2.5（V/V/V/V/V）裂解2h后抽濾，加少量TFA和CH2Cl2洗滌3次，合并濾液，將得到的濾液用氮?dú)獯等?/4體積后，滴入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，離心得到相應(yīng)的粗肽。
（2）多肽的純化及分析
將得到的粗肽溶于少量水,用Waters600半制備液相,XB-C18制備柱進(jìn)行純化.高效液相條件,流動(dòng)相A:水(含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的TFA);流動(dòng)相B:乙腈(含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的TFA);流動(dòng)相梯度:流動(dòng)相B15%～50%(體積分?jǐn)?shù)),20min;流速為3mL/min;檢測(cè)波長220nm.收集主峰,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈,凍干得到多肽純品。
（3）二硫鍵的形成
氯化血紅素催化氧化形成二硫鍵:稱取脫除Trt保護(hù)基的利那洛肽線性前體肽(3mg,2μmol),溶于pH＝8.0的Tris-HCl的緩沖溶液(5mL)中,加入20%(物質(zhì)的量比)的氯化血紅素(含少量DIEA),室溫敞口攪拌2h,反應(yīng)結(jié)束用HPLC分析.PhS(O)Ph/CH3SiCl3脫Acm保護(hù)基并形成二硫鍵:稱取多肽(0.6mg,0.4μmol),溶于TFA(0.4mL)中,加入CH3SiCl3(12μL,250equiv.),PhS(O)Ph(0.8mg,10equiv.),苯甲醚(4.3μL,100equiv.),室溫敞口攪拌20min加入干燥乙醚(10mL),4mol/L醋酸(5mL)震蕩,取水相進(jìn)行HPLC分析并分離。
圖2為半選擇性策略氧化形成含三對(duì)二硫鍵的利那洛肽路線用于治療便秘腸易激綜合征(IBS-C)和慢性特發(fā)性便秘(CIC)。
圖3為Constella(利那洛肽)利那洛肽的不良反應(yīng)包括腹瀉、腹痛和嘔吐。Linzess在6歲及以下兒童患者中禁用。6-17歲兒童患者不需禁忌該藥物治療。動(dòng)物研究表明，成年鼠劑量利那洛肽治療可導(dǎo)致幼鼠死亡。迄今尚未在兒童患者中開展過試驗(yàn)研究。報(bào)告最常見的Linzess治療相關(guān)性副反應(yīng)為腹瀉。1.http://news.medlive.cn/all/info-progress/show-49829_100.html.
2.衛(wèi)高菲,程卯生. 利那洛肽[J]. 中國藥物化學(xué)雜志,2013,(01):78.
3.http://yao.dxy.cn/article/37074?trace=related.