1268524-67-9

1068-57-1

1268524-70-4

在-78°C下，將叔丁醇鉀（1.0M THF溶液，0.3 mL，0.30 mmol，1.10當量）緩慢滴加到(S)-2-(5-(4-氯苯基)-6,7-二甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-噻吩并[2,3-e][1,4]二氮雜卓-3-基)乙酸叔丁酯（114 mg，0.27 mmol，1當量）的THF（1.8 mL，0.15 M）溶液中。將反應混合物緩慢升溫至-10°C，并在23°C下攪拌30分鐘。隨后，將反應混合物重新冷卻至-78°C，并加入氯代磷酸二乙酯（0.047 mL，0.32 mmol，1.20當量）。所得混合物在45分鐘內緩慢升溫至-10°C。接著，加入乙酰肼（30 mg，0.40 mmol，1.50當量），并在23°C下繼續(xù)攪拌反應混合物。1小時后，加入1-丁醇（2.25 mL），并將反應混合物加熱至90°C。再反應1小時后，在減壓下移除所有溶劑。殘余物通過快速柱色譜法（Combiflash系統(tǒng)，4 g硅膠，梯度0至100%乙酸乙酯-己烷）純化，得到目標產物(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-F][1,2,4]三唑并[4,3-A][1,4]二氮雜卓-6-基)乙酸叔丁酯（114 mg，92%收率），為白色固體，對映體純度為90%（通過Berger超臨界流體色譜法（SFC）測定，使用AS-H柱，85%己烷-甲醇，210 nm檢測波長，tR（R-對映體）= 1.59 min，tR（S-對映體）= 3.67 min）。進一步通過手性制備型HPLC（Agilent高壓液相色譜法，使用OD-H柱）純化，得到對映體純度大于99%的S-對映體。1H NMR（600 MHz，CDCl3，25°C）δ 7.39（d，J = 8.4 Hz，2H），7.31（d，J = 8.4 Hz，2H），4.54（t，J = 6.6 Hz，1H），3.54-3.52（m，2H），2.66（s，3H），2.39（s，3H），1.67（s，3H），1.48（s，9H）。13C NMR（150 MHz，CDCl3，25°C）δ 171.0，163.8，155.7，150.0，136.9，131.1，130.9，130.6，130.3，128.9，81.2，54.1，38.1，28.4，14.6，13.5，12.1。HRMS（ESI）計算值C21H24ClN2O3S [M + H]+：457.1460，實測值457.1451 m/z。TLC（EtOAc），Rf：0.32（UV）。[α]22D = +75（c 0.5，CHCl3）。

參考文獻：

[1] Patent: WO2011/143657, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 82-83

[2] Patent: WO2017/30814, 2017, A1. Location in patent: Paragraph 00227

[3] Patent: WO2018/109053, 2018, A1. Location in patent: Page/Page column 22; 23

(+)-JQ1對映體直接結合到BET bromodomain結構域的Kac結合位點。(+)-JQ1(500 nM)與染色質競爭性結合到BRD4，導致NMC細胞分化和生長停滯。通過Ki67染色減少，證明了(+)-JQ1(500 nM)減弱NMC 797和Per403細胞系的快速增殖。(+)-JQ1(500 nM)作用于NMC 797細胞，有效降低BRD4靶基因的表達。(+)-JQ1作用于NMC 11060細胞，抑制細胞活力， IC50為4 nM。(+)-JQ1作用于MM細胞系，強抑制MYC表達。(+)-JQ1抑制KMS-34和LR5增殖，IC50分別為 68 nM和98 nM。(+)-JQ1(500 nM)處理MM.1S細胞，導致S期細胞比例明顯下降，隨之細胞停滯在G0/G1期增多。(+)-JQ1(500 nM)通過β-半乳糖苷酶染色，導致明顯的細胞衰老。(+)-JQ1(800 nM)處理CD138+病患衍生的MM樣本，顯著降低細胞活力。 (+)-JQ1抑制LP-1細胞生長，GI50 為98 nM。(+)-JQ1(625 nM)導致LP-1細胞在G0/G1期的百分數增高。(+)-JQ1(500 nM)作用于LP-1細胞，抑制MYC, BRD4 和CDK9表達。(+)-JQ1(1 μM)處理潛伏感染的Jurkat T細胞，激活HIV轉錄。(+)-JQ1(50 μM)作用于Jurkat和HeLa細胞，主要刺激Tat依賴性的HIV轉錄。(+)-JQ1(5 μM)作用于J-Lat A2細胞，誘導Brd4解離，從而使Tat招募SEC到HIV啟動子上，誘導Pol II CTD磷酸化和病毒轉錄。