概述[1]
格里西輪是一種PPAR配體劑，可以此為有效成分，用于改善胰島素抗性或改善胰島素抗性綜合征。PPARγ配體具有改善胰島素抗性，預(yù)防和/或改善以2型糖尿病為首的、高胰島素血癥、脂肪代謝異常、肥胖(特別是內(nèi)臟脂肪型肥胖)、高血壓、動(dòng)脈硬化性疾病等胰島素抗性綜合征有效?；衔飳＠鸆N02824015.4首次報(bào)道了該化合物。
制備[1]
將1.2kg甘草(G.ウラレンシス：東北甘草)的微粉碎品浸到5.5L醋酸乙酯中，室溫、避光抽提7天后，通過(guò)過(guò)濾獲得抽提液。對(duì)其抽提液進(jìn)行減壓濃縮除去溶劑，獲得74.0g提取物。將提取物加到硅膠色譜柱上(1500ml)，用氯仿∶甲醇＝19∶1(v/v)進(jìn)行洗脫，得到級(jí)分。對(duì)洗脫級(jí)分進(jìn)行減壓濃縮除 去溶劑，獲得55.4g粗級(jí)分。通過(guò)反復(fù)進(jìn)行硅膠柱色譜、ODS硅膠柱色譜、裝了ODS柱的高效液相色譜、凝膠過(guò)濾色譜、分相薄層色譜，對(duì)所得粗級(jí)分進(jìn)行純化，得到格里西輪(80.7mg)。
藥理活性[1]
將CV-1細(xì)胞(來(lái)源于雄性非洲綠猴腎臟的培養(yǎng)細(xì)胞)接種到96孔培養(yǎng)板中，6×103細(xì)胞/孔，37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)。應(yīng)用含10％FBS(胎牛血清)、10ml/L青霉素-鏈霉素溶液(分別為5000IU/ml，5000ug/ml，GIBCO)、37mg/L抗壞血酸(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium，GIBCO)培養(yǎng)基。用OPTI-MEM(GIBCO)洗滌細(xì)胞后，用lipofectamine plus(GIBCO)轉(zhuǎn)化pM-mPPARγ和4×UASg-luc。pM-mPPAR γ是表達(dá)結(jié)合了酵母來(lái)源的轉(zhuǎn)錄因子GAL4基因(氨基酸序列1-147)和小鼠 PPARγ配體結(jié)合部位基因(氨基酸序列174-475)的嵌合蛋白用的質(zhì)粒。4×UASg-luc是將GAL4的應(yīng)答序列(UASg)4次插入到熒光素酶基因上游的報(bào)告質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染大約24小時(shí)后，換成含樣品的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24小時(shí)(n＝4)。將溶解到二甲基亞砜(DMSO)的樣品，無(wú)處置對(duì)照用DMSO，以1/1000量添 加到培養(yǎng)基中。
用含Ca，Mg的磷酸緩沖生理鹽水(PBS+)洗滌細(xì)胞后，添加ルツクライト(Packard)，用Topcount-microplate scintillation/luminescene counter(Packard)測(cè)定熒光素酶的熒光強(qiáng)度。對(duì)照組應(yīng)用pM(去除了PPARγ配體結(jié)合部位基因的質(zhì)粒)代替 pM-mPPARγ進(jìn)行與測(cè)定組同樣地測(cè)定。計(jì)算出測(cè)定組及對(duì)照組的熒光強(qiáng)度的均值(n＝4)的比值(測(cè)定組/對(duì)照組)，將對(duì)無(wú)處置對(duì)照的比活性作為樣品的 PPARγ配體活性。測(cè)定化合物2（格里西輪）的PPARγ配體活性的結(jié)果如下：
主要參考資料
[1] [中國(guó)發(fā)明] CN02824015.4 過(guò)氧化物酶體增殖劑應(yīng)答性受體配體劑及其制備方法