概述^[1]

物種：人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、羊、馬、牛、豬、雞、狗等等

來源： 原核表達

宿主：E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

預測分子量：34.7kDa

片段與標簽：Leu1937~Phe2210 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度> 95%

應用

Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

儲存：避免反復凍融。2-8°C不超過一個月，-80°C不超過12個月。

穩(wěn)定性：熱穩(wěn)定性以損失率顯示。損失率是由加速降解試驗決定，具體方法如下：在37°C孵育48小時，沒有顯著的降解或者沉淀產(chǎn)生。保質(zhì)期內(nèi)，在適當?shù)臈l件下存儲，損失率低于5%。    

C-Ros癌基因1(ROS1)重組蛋白表達服務(wù) - 原核表達[1]

大腸桿菌（E.coli）重組蛋白表達技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展，已經(jīng)變得非常成熟。但要在大腸桿菌表達體系獲得不錯的可溶以及高產(chǎn)量的蛋白表達，一個優(yōu)秀的表達策略必不可少。為了表達重組蛋白的高效表達以及有活性蛋白的表達，通常以下幾個方面會涉及：

C-Ros癌基因1(ROS1)重組蛋白宿主體系選擇[1]

首先要強調(diào)的是要求不同，選擇的表達宿主體系也不盡相同：細菌、酵母、絲狀真菌和單細胞藻類。每一種表達宿主都有各自的優(yōu)缺點。例如，如果需要表達的蛋白具有真核的翻譯后修飾（糖基化修飾），那么大腸桿菌等原核表達體系并不適用。大腸桿菌表達體系的優(yōu)點是：

（1）菌體繁殖速度快：20分鐘倍增一次，這意味著按照1/100的比例接種（MOI），只需要幾個小時培養(yǎng)基細菌即可到達穩(wěn)定期；

（2）容易實現(xiàn)高密度培養(yǎng)：理論培養(yǎng)密度是1 × 1013 cells/ml，實際培養(yǎng)過程中使用LB培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)大腸桿菌，<1 × 1010 cells/ml。在低溫（11℃）誘導蛋白表達時，細菌個數(shù)幾乎不增長。

（3）轉(zhuǎn)染外源DNA容易，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率高。

C-Ros癌基因1(ROS1)重組蛋白表達質(zhì)粒體系選擇[1]

目前最為常用的重組蛋白表達質(zhì)粒載體融合了復制子(Replicon)、啟動子(promoter)、篩選標簽(selection marker)、多克隆位點（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，如圖所示：

主要參考文獻

[1] 吳亞州 李佳 張蕾。pcDNA3.1-CD74-ROS1重組質(zhì)粒構(gòu)建與表達對肺癌細胞增殖及遷移的影響。2018年4期