背景[1-3]
8-羥基脫氧鳥苷抗體是可以特異性結(jié)合8-羥基脫氧鳥苷的免疫蛋白，其是將8-羥基脫氧鳥苷注射到無菌動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行系統(tǒng)免疫后在其血清中純化制得的高純度免疫蛋白。
羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy一2 deoxyguanosine，8-OHDG)是活性氧自由基如羥自由基、單線態(tài)氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產(chǎn)生的一種氧化性加合物。衰老的自由基學(xué)說認(rèn)為，衰老是由自由基引起組織損害的結(jié)果。輻射和內(nèi)源性與外源性化合物產(chǎn)生的活性氧基與突變、癌癥及衰老等有關(guān)。自由基對(duì)生物體具有多種損害作用，其作用機(jī)制主要涉及DNA的損傷。機(jī)體的氧化損傷廣泛存在，主要表現(xiàn)為生物大分子(如DNA、蛋白質(zhì)、脂類等)結(jié)構(gòu)和功能的損傷，并由此導(dǎo)致基因突變、細(xì)胞癌變及個(gè)體衰老等現(xiàn)象。8-OHDG可以通過高靈敏度、高選擇性的檢測(cè)手段來檢測(cè)，已成為DNA氧化損傷中最常用的生物標(biāo)志物(Biomarker)。8-OHDG作為內(nèi)源性及外源性因素對(duì)DNA氧化損傷作用的生物標(biāo)志物，是一個(gè)極有前途的指標(biāo)，通過8-OHDG的檢測(cè)可以評(píng)估體內(nèi)氧化損傷和修復(fù)的程度，氧化應(yīng)激與DNA損傷的相互關(guān)系，對(duì)研究退行性疾病、衰老機(jī)制、癌發(fā)生機(jī)制、環(huán)境毒物與氧化應(yīng)激的關(guān)系等均有重要的意義，也可以用來評(píng)價(jià)抗氧化劑治療DNA氧化損傷的效果。已經(jīng)證實(shí)，飲食、超氧化物歧化酶、Melatonin等對(duì)8-OHDG水平具有調(diào)節(jié)作用。近期日本學(xué)者制成一種抗氧化作用雞尾酒，由葵花籽、綠茶和維生素c組成，證實(shí)了對(duì)FeC12誘導(dǎo)的8-OHDG異常增加有回調(diào)作用。
應(yīng)用[4][5]
用于8-羥基脫氧鳥苷ELISA實(shí)驗(yàn)方法的建立及其在妊娠糖尿病研究中的初步應(yīng)用研究
8羥基-2-脫氧鳥苷(8-hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHdG)是活性氧自由基如羥自由基、單線態(tài)氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產(chǎn)生的一種氧化性加合物,若不被及時(shí)清除可引起DNA復(fù)制過程中G-C/A-T型堿基配對(duì)錯(cuò)誤從而引起基因點(diǎn)突變甚至癌變。研究表明糖尿病、癌癥、以及心血管疾病的發(fā)病和疾病發(fā)展都與氧化損傷有著密切的關(guān)系,也都可以檢測(cè)到機(jī)體8-OHdG含量的升高,因此測(cè)定機(jī)體8-OHdG水平不僅可以評(píng)估機(jī)體受到的氧化損傷程度,還可以輔助相關(guān)疾病的診斷或反映相關(guān)疾病的進(jìn)程。獲得8-OHdG特異性配對(duì)抗體,建立生物素-親和素雙抗夾心ELISA檢測(cè)8-OHdG的方法,并在此基礎(chǔ)上檢測(cè)妊糖患者和健康孕婦的8-OHdG含量,對(duì)比研究妊娠糖尿病與8-OHdG水平的關(guān)系。
研究方法:本研究通過偶聯(lián)形成8-OHdG-mcKLH復(fù)合物作為免疫原,免疫注射Balb/C小鼠,并進(jìn)行細(xì)胞融合得到單克隆抗體。通過ELISA法篩選獲得陽性雜交瘤細(xì)胞株,再對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大化生產(chǎn),并對(duì)得到的腹水抗體進(jìn)行純化,篩選得到8-OHdG的高特異性配對(duì)抗體。通過測(cè)定抗體純度、交叉反應(yīng)性、效價(jià)等方法判斷該單克隆抗體的特異性和靈敏性。以配對(duì)抗體為基礎(chǔ),通過篩選包被液、封閉液、包被抗體與酶標(biāo)抗體的濃度等條件,建立生物素-親和素標(biāo)記的雙抗夾心ELISA定量檢測(cè)8-OHdG的方法,并通過批內(nèi)批間實(shí)驗(yàn)、回收率等方法來評(píng)價(jià)該檢測(cè)方法的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性。
參考文獻(xiàn)
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