背景[1-3]
ANTI-CD86抗體是一類可以特異性結(jié)合ANTI-CD86的多克隆抗體，主要用于檢測ANTI-CD86的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標(biāo)本中ANTI-CD86水平。用純化的ANTI-CD86抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-CD86，再與HRP標(biāo)記的ANTI-CD86抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-CD86呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中ANTI-CD86濃度。
CD86，別名為B7.2，分子量為80Kd，表達(dá)于樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、記憶T淋巴細(xì)胞、生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞、活化B淋巴細(xì)胞及活化T淋巴細(xì)胞。他屬于免疫球蛋白超家族，其配體是CD28和CD152（CTLA4）。
活化的T淋巴細(xì)胞在機(jī)體的抗腫瘤、抗感染和自身免疫疾病中發(fā)揮重要作用。T細(xì)胞的活化不僅需要T細(xì)胞受體（TCR）與抗原肽-MHC復(fù)合物作用產(chǎn)生的信號，還需要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞（APC）表面的B7家族協(xié)同刺激分子與T細(xì)胞上的相應(yīng)受體結(jié)合產(chǎn)生的第二信號。
協(xié)同刺激分子與其受體結(jié)合產(chǎn)生正性或負(fù)性信號。協(xié)同刺激分子CD80和CD86與其受體CD28結(jié)合產(chǎn)生正性信號，或與其受體CTLA-4結(jié)合提供負(fù)性信號，調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性，進(jìn)而調(diào)控機(jī)體的免疫反應(yīng)。協(xié)同刺激分子CD80和CD86表達(dá)在APC細(xì)胞上，而在多數(shù)的腫瘤組織及細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)，從而不能有效的誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化，引起腫瘤細(xì)胞免疫逃逸而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。
應(yīng)用[4][5]
用于益生菌提取物L(fēng)FK對變應(yīng)性鼻炎小鼠模型脾臟組織中CD80和CD86表達(dá)的影響研究
對變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型經(jīng)口途徑分別給予酶裂解的腸球菌FK-23株(lysed Enterococcus faecalis FK-23,LFK),觀測小鼠脾臟內(nèi)抗原提呈細(xì)胞(antigen-presenting cells,APC)表面組織中共刺激分子CD80和CD86的表達(dá)改變,評價益生菌對實驗性AR的免疫調(diào)節(jié)作用。
方法：共計75只BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組：①陽性對照組；②LFK干預(yù)組；③陰性對照組。采用OVA腹腔注射及鼻部激發(fā)建立小鼠AR模型,陰性對照組小鼠采用生理鹽水代替OVA進(jìn)行腹腔注射及滴鼻。
用LFK菌液分別對AR小鼠模型進(jìn)行灌胃,共計3周；陽性和陰性對照組以生理鹽水代替菌液灌胃處理。觀測第21天小鼠搔鼻和噴嚏次數(shù)。第22天殺鼠取材,小鼠脾臟組織用免疫組織化學(xué)法檢測APC表面共刺激分子CD80和CD86的表達(dá)。并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測小鼠血清中細(xì)胞因子IL-12水平。
結(jié)果：第21天小鼠搔鼻和噴嚏次數(shù),陽性對照組及LFK干預(yù)組明顯高于陰性對照組(P<0.05),LFK干預(yù)組明顯低于陽性對照組(P<0.05)。血清IL-12水平陽性對照組較陰性對照組顯著降低(P<0.001),LFK干預(yù)組較陽性對照組顯著升高(P<0.001),但與陰性對照組相比仍明顯降低(P<0.001)。
小鼠脾臟APC表面共刺激分子組織中CD80的表達(dá),陽性對照組明顯低于陰性對照組及LFK干預(yù)組(P<0.05),LFK干預(yù)組與陰性對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CD86的表達(dá),陽性對照組明顯高于陰性對照組及LFK灌胃干預(yù)組(P<0.05),LFK干預(yù)組與陰性對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
參考文獻(xiàn)
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