背景[1-3]
兔多克隆抗體TO BAX是一類可以特異性結(jié)合BAX的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)BAX的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中BAX水平。用純化的BAX抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入BAX，再與HRP標(biāo)記的BAX抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BAX呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中BAX濃度。
bax基因是人體最主要的凋亡基因，屬于bcl-2基因家族，編碼的Bax蛋白可與Bcl-2形成異二聚體，對(duì)Bcl-2產(chǎn)生阻抑作用。研究發(fā)現(xiàn)Bax/Bcl-2兩蛋白之間的比例關(guān)系是決定對(duì)細(xì)胞凋亡(Apoptosis)抑制作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵因素，因此認(rèn)為，bax是極重要的促細(xì)胞凋亡(Apoptosis)基因之一。Bax的表達(dá)更為廣泛，它可出現(xiàn)在肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、呼吸系上皮細(xì)胞和支氣管平滑肌、血管平滑肌細(xì)胞中。
BAX屬于兔抗人多克隆抗體。試驗(yàn)中適用組織為石蠟切片，其陽(yáng)性部位為細(xì)胞漿，陽(yáng)性對(duì)照為乳腺癌，組織處理為熱修復(fù)。BAX是與BCL-2同源的水溶性相關(guān)蛋白，是BCL-2基因家族中細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因，BAX的過(guò)度表達(dá)可拮抗BCL-2的保護(hù)效應(yīng)而使細(xì)胞趨于死亡。目前多和BCL-2一起用于腫瘤的研究。
應(yīng)用[4][5]
用于中藥活骨注射液在兔股骨頭缺血性壞死修復(fù)過(guò)程中VEGF、bFGF、IGF-1、0PG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3的表達(dá)情況的實(shí)驗(yàn)研究
通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法,從細(xì)胞分子水平,研究中藥活骨注射液對(duì)VEGF、bFGF、IGF-1、OPG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3表達(dá)的影響,探討活骨注射液治療股骨頭缺血性壞死的作用機(jī)制,為活骨注射液治療股骨頭缺血性壞死提供理論依據(jù)。
研究方法：隨機(jī)分為兩組,即空白組(30只)、模型組(90只)。模型組行兔股骨頭壞死動(dòng)物造模后再隨機(jī)分為3組：鹽水組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組各30只動(dòng)物?？瞻捉M正常飼養(yǎng),不給予任何藥物治療。鹽水組給予0.9%生理鹽水0.70ml/次,每三日一次髖關(guān)節(jié)腔灌注。
對(duì)照組給予冠心寧注射液每三日一次髖關(guān)節(jié)灌注0.70ml/次。實(shí)驗(yàn)組給予活骨注射液每三日一次髖關(guān)節(jié)灌注,劑量0.70ml/次。造模術(shù)后兩周開(kāi)始治療,各組按1、3、6、9、12周時(shí)間點(diǎn)分批處死動(dòng)物,每批每組6只,進(jìn)行檢測(cè)。
采用免疫組化、Real-time PCR及Western blot三種方法檢測(cè)兔股骨頭缺血性壞死修復(fù)過(guò)程中VEGF、bFGF、IGF-1蛋白的表達(dá)情況。
參考文獻(xiàn)
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[5]張文進(jìn).中藥活骨注射液在兔股骨頭缺血性壞死修復(fù)過(guò)程中VEGF、bFGF、IGF-1、0PG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3的表達(dá)情況的實(shí)驗(yàn)研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2016.