背景[1-3]
ANTI-BCL-2抗體是一類(lèi)可以特異性結(jié)合ANTI-BCL-2的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)ANTI-BCL-2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中ANTI-BCL-2水平。用純化的ANTI-BCL-2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-BCL-2，再與HRP標(biāo)記的ANTI-BCL-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-BCL-2呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中ANTI-BCL-2濃度。
B淋巴細(xì)胞瘤-2基因簡(jiǎn)稱(chēng)bcl-2（B-cell lymphoma-2）,是細(xì)胞凋亡研究中最受重視的癌基因之一。Bcl-2可以抑制由多種細(xì)胞毒因素所引起的細(xì)胞死亡。Bcl-2的過(guò)度表達(dá)能增強(qiáng)所觀察細(xì)胞對(duì)大多數(shù)細(xì)胞毒素的抵抗性。這一發(fā)現(xiàn)使人們認(rèn)識(shí)到凋亡的各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有一個(gè)共同的通路或交匯點(diǎn)，而該通路或交匯點(diǎn)受Bcl-2調(diào)節(jié)。
實(shí)驗(yàn)表明，Bcl-2可增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性，抑制大多數(shù)化療藥物所引起的靶細(xì)胞凋亡，但其本身并不能抑制這些因素對(duì)細(xì)胞的損傷；同樣地，它也不能促進(jìn)DNA修復(fù)。
p53蛋白是DNA損傷的一個(gè)分子傳感器，已證實(shí)Bcl-2能抑制p53介導(dǎo)的凋亡，但不能抑制p53向核內(nèi)轉(zhuǎn)位或者p53介導(dǎo)的生長(zhǎng)停滯，可能Bcl-2的作用是在DNA損傷后，阻止激活凋亡機(jī)制的信號(hào)到達(dá)其靶分子；
在細(xì)胞毒性T細(xì)胞中，由顆粒酶B激活Caspases家族的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸蛋白酶所誘導(dǎo)的凋亡不依賴(lài)于Bcl-2，顆粒酶B可能僅作用于凋亡路徑中Bcl-2調(diào)節(jié)位點(diǎn)的下游。以上結(jié)果表明在凋亡途徑中Bcl-2的作用位點(diǎn)是在信號(hào)分子和效應(yīng)蛋白酶之間的位置。
應(yīng)用[4][5]
用于P38MAPK抑制劑對(duì)血管性癡呆大鼠海馬細(xì)胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)及其學(xué)習(xí)記憶能力的影響研究
發(fā)現(xiàn)減少Bcl-2、增加Bax的表達(dá)可激活Caspase-3和p53,進(jìn)一步誘發(fā)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡。Bcl-2和Caspase-3是參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的兩個(gè)重要分子,Bcl-2的過(guò)量表達(dá)能有效地抑制Caspase-3激活,最終引起海馬區(qū)細(xì)胞凋亡。p38MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的激活是缺血低灌注損傷引起神經(jīng)元凋亡的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,P38MAPK可通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)影響細(xì)胞凋亡。
觀察血管性癡呆大鼠海馬區(qū)p38MAPK磷酸化的變化,探討p38MAPK在血管性癡呆發(fā)病機(jī)制中的作用,并利用p38MAPK抑制劑SB202190作為研究干預(yù)方式,血管性癡呆大鼠側(cè)腦室注射SB202190抑制p38MAPK信號(hào)通路后,通過(guò)Western Blot蛋白印跡法、免疫熒光法和激光掃描共聚焦顯微鏡等技術(shù)觀察血管性癡呆大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡、Bcl-2和Caspase-3凋亡因子表達(dá)變化和大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變,探討p38MAPK信號(hào)通路對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響,并初步探討其作用機(jī)制。
參考文獻(xiàn)
[1]Transient focal cerebral ischemia induces long-term cognitive function deficit in an experimental ischemic stroke model[J].Wenjun Li,Renqi Huang,Ritu A.Shetty,Nopporn Thangthaeng,Ran Liu,Zhenglan Chen,Nathalie Sumien,Margaret Rutledge,Glenn H.Dillon,Fang Yuan,Michael J.Forster,James W.Simpkins,Shao-Hua Yang.Neurobiology of Disease.2013
[2]Mechanism of Activation in NMDA Receptors[J].Vasanthi Jayaraman,Anu Rambhadran.Biophysical Journal.2011(3)
[3]p38 MAPK and ERK1/2 dictate cell death/survival response to different pro-oxidant stimuli via p53 and Nrf2 in neuroblastoma cells SH-SY5Y[J].Giuseppe Filomeni,Sara Piccirillo,Giuseppe Rotilio,Maria R.Ciriolo.Biochemical Pharmacology.2012(10)
[4]Focal Adhesion Kinase Activates NF-κB via the ERK1/2 and p38MAPK Pathways in Amyloid-β25-35-Induced Apoptosis in PC12 Cells[J].Xichao Wang,Qun Chen,Da Xing.Journal of Alzheimer’s Disease.2012(1)
[5]楊申.P38MAPK抑制劑對(duì)血管性癡呆大鼠海馬細(xì)胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)及其學(xué)習(xí)記憶能力的影響[D].山東大學(xué),2013.