背景[1-3]
牛I型膠原(COL I)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被牛I型膠原(ColI)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛I型膠原(ColI)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
膠原蛋白是生物高分子，動物結(jié)締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內(nèi)含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質(zhì)總量的25%～30%，某些生物體甚至高達80%以上。
膠原蛋白種類較多，常見類型為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。
膠原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領(lǐng)域獲得廣泛的應(yīng)用。
應(yīng)用[4][5]
用于免疫細胞遷移試驗評價生物材料免疫原性的探索性研究
通過兔血淋巴細胞的遷移試驗，檢測刺激劑對淋巴細胞的劑量效應(yīng)，初步建立一種兔淋巴細胞遷移試驗評價生物材料免疫原性的實驗方法。
再次通過檢測小鼠脾臟淋巴細胞的遷移，并初步建立由細胞遷移試驗評價材料免疫原性的實驗方法；
基于本實驗室前期探索的朗格漢斯細胞體外誘導(dǎo)方案，采用掃描電鏡和透射電鏡觀察朗格漢斯細胞形態(tài)及CD196和CD86的表型鑒定，篩選出朗格漢斯細胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的方案，預(yù)期為探索朗格漢斯細胞遷移試驗提供效應(yīng)細胞。
不同生物材料浸提液作用下的小鼠淋巴細胞遷移試驗3.1制備生物材料浸提液：（1）可溶性材料，選取牛I型膠原，將之溶解于純度＞99.5%的乙酸溶液，小量分裝，保存于4℃。
（2）不溶性材料，選取脫細胞凍干牛真皮，將其稱量后，按比例浸泡于RPMI-1640，孵育24小時，收集其浸提液，小量分裝保存于-20℃。3.2取BALB/c小鼠（雌雄不限）脾臟，采用研磨法分離淋巴細胞，分別用生物材料浸提液作為淋巴細胞分泌趨化因子的刺激劑。
在細胞懸液中，加入不同濃度材料浸提液，置37℃含5%CO2的孵箱中生長培養(yǎng)72小時，收集細胞上清。3.3將細胞上清作為趨化因子的來源，誘導(dǎo)小鼠淋巴細胞遷移，用Transwell法測定細胞遷移率，比較各種材料浸提液的遷移效果。了解其材料的淋巴細胞遷移效應(yīng)。
參考文獻
[1]Regulatory T cell migration during an immune response[J].Yaozhong Ding,Jiangnan Xu,Jonathan S.Bromberg.Trends in Immunology.2012(4)
[2]Increased prevalence of peripheral blood granulysin-producing cytotoxic T lymphocytes in preeclampsia[J].Attila Molvarec,Arihiro Shiozaki,Mika Ito,Gergely Toldi,Balázs Stenczer,András Szarka,Akitoshi Nakashima,Barna Vásárhelyi,János Rigó,Shigeru Saito.Journal of Reproductive Immunology.2011(1)
[3]CCR6 as a possible therapeutic target in psoriasis[J].Michael N Hedrick,Anke S Lonsdorf,Sam T Hwang,Joshua M Farber.Expert Opinion on Therapeutic Targets.2010(9)
[4]Infection of non-encapsulated species of Trichinella ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis involving suppression of Th17 and Th1 response[J].Zhiliang Wu,Isao Nagano,Kazunobu Asano,Yuzo Takahashi.Parasitology Research.2010(5)
[5]周靈.免疫細胞遷移試驗評價生物材料免疫原性的探索性研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué),2012.