背景^[1-3]

脫氧核糖核酸酶2抗體是一類可以特異性結合脫氧核糖核酸酶2的多克隆抗體，主要用于檢測脫氧核糖核酸酶2的免疫學實驗。脫氧核糖核酸（DNA）是生物細胞內攜帶有合成RNA和蛋白質所必需的遺傳信息的一種核酸，是生物體發(fā)育和正常運作必不可少的生物大分子。

脫氧核糖核酸酶即是DNA酶，灰色至類白色粉末。用于從蛋白樣品中去除DNA，但無法水解緊密的核染色質。

脫氧核糖核酸（英文DeoxyriboNucleic Acid，縮寫為DNA）是生物細胞內含有的四種生物大分子之一核酸的一種。

DNA攜帶有合成RNA和蛋白質所必需的遺傳信息，是生物體發(fā)育和正常運作必不可少的生物大分子。

DNA由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物。脫氧核苷酸由堿基、脫氧核糖和磷酸構成。其中堿基有4種：腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。

DNA分子結構中，兩條多脫氧核苷酸鏈圍繞一個共同的中心軸盤繞，構成雙螺旋結構。

脫氧核糖-磷酸鏈在螺旋結構的外面，堿基朝向里面。兩條多脫氧核苷酸鏈反向互補，通過堿基間的氫鍵形成的堿基配對相連，形成相當穩(wěn)定的組合。

應用^[4][5]

用于旋毛蟲新生幼蟲脫氧核糖核酸酶Ⅱ表達及鑒定研究

通過篩選旋毛蟲新生幼蟲差減cDNA文庫所獲得的新生幼蟲期特異性表達基因N5（基因庫注冊號為:AF331159）進行Interproscan檢索,發(fā)現(xiàn)N5可能編碼脫氧核糖核酸酶Ⅱ（DNaseⅡ）。

構建原核表達載體pET28a-N5。將重組質粒pET28a-N5放入表達菌E.coli BL21（DE3）。用IPTG在不同的表達條件（不同溫度、IPTG濃度、細菌的OD值）對重組表達菌BL21（DE3）進行誘導,對菌體裂解物進行SDS-PAGE分析。結果顯示:不同誘導條件下表達表達量不同。

利用尿素提取包涵體法提取不同條件下表達的包涵體。將包涵體分別溶于TE（Triscl-EDTA）、PBS（磷酸鹽緩沖液）置于4℃冰箱中復性,然后用包涵體復性后的上清液對λDNA進行酶切分析,結果表明:復性后的包涵體上清液中的可溶蛋白具有較強的核酸酶活性。

通過對N5基因序列分析以及將N5同其他物種的脫氧核糖核酸酶Ⅱ基因進行比對,發(fā)現(xiàn)N5基因在基因水平上屬于編碼脫氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族成員,并找出N5基因編碼活性中心氨基酸和中心內關鍵氨基酸的堿基序列,通過PCR進行對編碼關鍵氨基酸-組氨酸的密碼子分別定點突變?yōu)榫幋a賴氨酸和絲氨酸的密碼子（突變后的基因分別命名為MC578A-29、MC578B-29）。

突變后,同樣構建原核表達載體pET28a-MC578A-29、pET28a-MC578B-29,進行誘導表達和酶活性測定,發(fā)現(xiàn)突變后所編碼的蛋白通過溶于PBS,4℃進行復性,復性后上清液中的可溶蛋白核酸酶活性明顯下降或喪失。

說明:活性中心的分析和定點突變位置的選擇是正確的。對N5和MC578A-29、MC578B-29表達產(chǎn)物在不同條件進行酶活分析,證明該N5基因編碼的脫氧核糖核酸酶具有DNaseII的特性。

參考文獻

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[3]Characterization and tissue distribution of multiple agouti-family genes in pufferfish,Takifugu rubripes[J].Tadahide Kurokawa,Koji Murashita,Susumu Uji.Peptides.2006(12)

[4]DNase II deficiency impairs innate immune function in Drosophila[J].Chang-Soo Seong,Armando Varela-Ramirez,Renato J.Aguilera.Cellular Immunology.2006(1)

[5]龍民慧.旋毛蟲新生幼蟲脫氧核糖核酸酶Ⅱ表達及鑒定[D].吉林大學,2005.