一氧化氮NO (即血管內(nèi)皮舒張因子)，在生物體內(nèi)作為一種反應(yīng)性極強(qiáng)的自由基，兼有第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)作用，同時(shí)又是一種效應(yīng)分子，在體內(nèi)具有廣泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，調(diào)節(jié)腦血流，介導(dǎo)細(xì)胞毒效應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)，參與學(xué)習(xí)和記憶、動(dòng)脈粥樣硬化等作用。NO 產(chǎn)生異常與某些疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。因此，近年來對(duì)NO的研究越來越受到廣大醫(yī)學(xué)科學(xué)工作者的重視。
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為硝酸鹽（NO3ˉ）和亞硝酸鹽（NO2ˉ），血清(NO3ˉ)與(NO2ˉ)濃度之和（NO3ˉ＋NO2ˉ）才能準(zhǔn)確代表體內(nèi)(NO)水平。血清（NO3ˉ＋NO2ˉ）含量測(cè)定，國(guó)內(nèi)有的單位采用金屬鎘還原法，但該法操作繁瑣（血清需除蛋白），反應(yīng)不易控制（金屬鎘可將NO2ˉ進(jìn)一步還原），且不能完全將NO3ˉ還原為 NO2ˉ，準(zhǔn)確性差。目前常用的試劑盒有以下兩種。
一、（酶法）比色法
（一氧化氮（NO）測(cè)定試劑盒 圖片來自網(wǎng)絡(luò)）
01.檢測(cè)范圍：
血清（漿）、紅細(xì)胞、動(dòng)物組織樣本、培養(yǎng)的細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織。
02.測(cè)試原理：
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO:和NO,而NO又進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為NO.本法利用硝酸還原酶特異性將NO還原為NO2,通過顯色深沒測(cè)定其濃度的高低。
03.測(cè)試所需的儀器設(shè)備
a）分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為550nm）
b）恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
c）漩渦混勻器
d）臺(tái)式離心機(jī)
e）微量移液器
（微量移液器 圖片來自網(wǎng)絡(luò)）
04.樣本收集與前處理：
a）血清（漿）可直接測(cè)定。
b）紅細(xì)胞：需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
c）動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
（組織勻漿 圖片來自網(wǎng)絡(luò)）
d）培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
e）具體的樣本前處理：一般參考各公司的詳細(xì)說明書。
05.注意事項(xiàng)
a）冬天測(cè)試時(shí)，所有的試劑均應(yīng)于37℃預(yù)熱5分鐘。
b）取上清時(shí)，如果上清不夠，請(qǐng)延長(zhǎng)離心時(shí)間，或者少取一點(diǎn)。例如:可取0.4或0.45ml,但同一批實(shí)驗(yàn)所有的管子都應(yīng)取上清的 要一致，千萬不可將沉淀吸上。
c）因組織中NO含量較少，組織勻漿般為 10%或20%，且做好的組織勻漿離心速度為 2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，轉(zhuǎn)速不可過高，時(shí)間不可太長(zhǎng)，樣本取樣量較大，以0.3~0.5ml 左右為宜。
d）試劑盒中試劑一般避免反復(fù)凍融，如果需要分批實(shí)驗(yàn)(3次以上)，可以在次實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑分裝后再保存，根據(jù)每次實(shí)驗(yàn)時(shí)的試劑用量取出待用。配好的顯 色劑避光保存。
e）血清(漿)、組織等標(biāo)本如不馬上檢測(cè)，應(yīng)放于-70℃以下保存，半年內(nèi)有效。
f）所有配試劑的雙蒸水和空白管中加的雙蒸水均要用不含NO2的雙蒸水或三蒸水。(試劑盒中一般配有雙蒸水)
g）在樣本與底物反應(yīng)完畢后，離心，取上清時(shí)千萬不可將沉淀吸出，否則吸光度會(huì)增高很多，明顯影響結(jié)果的真實(shí)性。
①、用一次性塑料試管或干凈的離心管:
②、若用玻璃管,清洗如下:先用洗滌劑泡半個(gè)小時(shí)以上，煮0.5-1個(gè)小時(shí)，洗刷后，用自來水沖洗15-20遍，甩干，雙蒸水沖洗1-2遍，烘干。
06.優(yōu)點(diǎn)
a）冬天測(cè)試時(shí)，快速簡(jiǎn)便：全程約2小時(shí)。
b）穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。
c）再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
d）回收試驗(yàn)：X =103.3%。
e）受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
f）測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血液、組織、細(xì)胞、各種培養(yǎng)細(xì)胞、腦脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物組織以及各種水產(chǎn)效果均佳。
二、微板法
（一氧化氮（NO）測(cè)定試劑盒 圖片來自網(wǎng)絡(luò)）
01.檢測(cè)范圍
可測(cè)動(dòng)物血液、組織、細(xì)胞、各種培養(yǎng)細(xì)胞、腦脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物組織以及各種水產(chǎn)。
02.樣本收集與處理
a）血清（漿）可直接測(cè)定。
b）紅細(xì)胞：一般需按照所購(gòu)試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
c）a動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
d）培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
03.所需儀器及自備試劑
a）分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為550nm）
b）恒溫水浴箱或氣浴箱（孵育溫度為37℃）
c）漩渦混勻器
d）臺(tái)式離心機(jī)
e）微量移液器
04.優(yōu)點(diǎn)
a）快速簡(jiǎn)便：全程約2小時(shí)，可測(cè)100例以上樣本。
b）穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個(gè)月有效。
c）再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
d）回收試驗(yàn)：X =101%。
e）受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
f）測(cè)試面廣。