背景[1-3]
DI TNC1大鼠腦間質(zhì)細胞系是分離自大鼠腦組織的一類間質(zhì)細胞系，主要用于體外腦間質(zhì)細胞的相關研究。
間質(zhì)細胞是這個器官內(nèi)存在的那些輔助實質(zhì)細胞完成器官功能的細胞，呈多角形或圓形，體積大，核呈圓形。比如腦內(nèi)的神經(jīng)元就是實質(zhì)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞起支持營養(yǎng)神經(jīng)細胞的作用，算是一種間質(zhì)細胞，再如肝臟細胞是實質(zhì)細胞，肝小葉間的纖維細胞就是間質(zhì)細胞，起支持作用。
DI TNC1大鼠腦間質(zhì)細胞
細胞培養(yǎng)步驟:
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備基礎培養(yǎng)基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
應用[4][5]
用于重組人白細胞介素10基因慢病毒載體的構建及其鎮(zhèn)痛效應的研究
構建含人白細胞介素10基因的重組慢病毒載體LV／hIL-10，觀察LV／hIL-10對激活的星形膠質(zhì)細胞的干預作用及其對慢性疼痛模型大鼠（chronic constriction injury，CCI）的鎮(zhèn)痛效應，初步探討HMGB1是否參與了CCI大鼠的痛敏維持。
方法1．合成引物，以pCYIL-10質(zhì)粒為模板，PCR擴增出hIL-10基因，并重組到質(zhì)粒pWPXL-GFP，酶切、測序鑒定正確后，將重組質(zhì)粒pWPXL-hIL-10與包膜質(zhì)粒pMD2．G、包裝質(zhì)粒psPAX2共轉(zhuǎn)染到293T細胞，包裝出復制缺陷的慢病毒顆粒，進行病毒滴度的測定。
2．將DI TNCI（大鼠大腦皮質(zhì)組織來源的星形膠質(zhì)細胞株）細胞培養(yǎng)分瓶后，用不同濃度（0、250、500、750、1000ng／IIlL）大腸桿菌的LPS作用于DI TNC1 8h后，ELISA測定促炎因子TNF-α、IL-1β的分泌。500ng／ml LPS作用于DI TNC1不同時間后，PT-PCR測定TNF-α、IL-1β和晚期炎癥介質(zhì)高遷移率族蛋白-1（High MobilityGroup Box1，HMGB1）的mRNA表達，ELISA測定TNF-α、IL-1β的分泌，Western Blot測定HMGB1的蛋白表達。
LV／hIL-10、LV-GFP瞬時轉(zhuǎn)染DI TNC1，4h后檢測IL-10的mRNA表達和蛋白分泌，LV／hIL-10、LV-GFP轉(zhuǎn)染LPS所致DI TNC1細胞后，分別測定各時點TNF-α、IL-1β和HMGB1 mRNA的表達及其分泌。
參考文獻
[1]Preversus postformlin effects of ketamine or large-dose alfentanil in the rat:discordance between pain behavior and spinal Fos-like immunoreactivity.Gilron I,Quirion R,Codere TJ,et al.Anesthesia and Analgesia.1999
[2]Kinecticanal-yses of stability of simple and complex retroviral vectors.HigashikawaF,ChangL.Journal of Virology.2001
[3]Nerve growth factor in glia and inflammatory cells of the injured rat spinal cord.Krenz NR,Weaver LC.Journal of Neurochemistry.2000
[4]Activity-dependent neuronalcontrol of gap-junctional communication in astrocytes.Rouach N,Glowinski J,Giaume C.Journal of Cell Biology,The.2000
[5]賀正華.重組人白細胞介素10基因慢病毒載體的構建及其鎮(zhèn)痛效應的研究[D].中南大學,2007.