背景[1-3]
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞是采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，該細(xì)胞可通過vWF/Factor VIII和CD31(PECAM)特異性抗體的免疫熒光鑒定以及DiI-Ac-LDL的攝取來鑒定。該細(xì)胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌。
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至肛門的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過直腸經(jīng)肛門排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細(xì)微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進(jìn)行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，在內(nèi)皮外面有一薄層結(jié)締組織。
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出細(xì)胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.終末分化的細(xì)胞，建議直接使用，不建議擴(kuò)大培養(yǎng)。
3.待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)孔培養(yǎng)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：
應(yīng)用[4][5]
用于微血管內(nèi)皮細(xì)胞對嗜中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響研究
在研究嗜中性粒細(xì)胞的滅菌功能是否需要微血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活,從而為篩選有效抗菌中獸藥奠定理論基礎(chǔ)。
方法：利用Transwell通透性支持物,建立了跨越大鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的中性粒細(xì)胞遷移模型。并且通過菌落計(jì)數(shù)方法檢測了血液中性粒細(xì)胞和跨內(nèi)皮遷移的中性粒細(xì)胞胞內(nèi)胞外殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和嗜酸乳桿菌的情況。利用酶標(biāo)儀檢測中性粒細(xì)胞MMP-9的濃度和熒光測定的方法檢測了溶菌酶的活性。
結(jié)果：1、血液中性粒細(xì)胞只能吞噬細(xì)菌但并不消滅細(xì)菌。
2、LPS和HLa損傷的RIMVECs后,使跨內(nèi)皮遷移的中性粒細(xì)胞喪失了胞內(nèi)胞外殺菌的能力。
3、而IL-1α誘導(dǎo)的RIMVECs使跨內(nèi)皮遷移的中性粒細(xì)胞具有胞內(nèi)胞外殺滅革蘭氏陽性菌。
4、LTB4和fMLP+CytB趨化的嗜中性粒細(xì)胞胞內(nèi)外殺菌效果明顯。
5、IL-1c使得跨內(nèi)皮遷移的中性粒細(xì)胞MMP-9濃度和溶菌酶活性極顯著升高（P<0.01,P<0.001）。
參考文獻(xiàn)
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[3]Emerging mechanisms of neutrophil recruitment across endothelium[J].Marcie R.Williams,Verónica Azcutia,Gail Newton,Pilar Alcaide,Francis W.Luscinskas.Trends in Immunology.2011(10)
[4]Complementary targeting of liposomes to IL-1αand TNF-αactivated endothelial cells via the transient expression of VCAM1 and E-selectin[J].Rico C.Gunawan,Dariela Almeda,Debra T.Auguste.Biomaterials.2011(36)
[5]劉曉曄.微血管內(nèi)皮細(xì)胞對嗜中性粒細(xì)胞殺菌功能的影響[D].北京農(nóng)學(xué)院,2014.