背景[1-3]
HS68人男性正常龜頭細(xì)胞是由Owens·R·B于1969年建株，細(xì)胞分離自正常男性的海綿體包皮組織屬于成纖維細(xì)胞樣貼壁細(xì)胞。生長(zhǎng)培養(yǎng)基未MEM＋10%FBS＋1%P/S，培養(yǎng)條件為氣相：空氣，95%；CO2，5%；溫度：37℃。
HS68人男性正常龜頭細(xì)胞
貼壁細(xì)胞處理方法：
1. 收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
3. 顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5. 用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2培養(yǎng)。
應(yīng)用[4][5]
用于基于細(xì)胞層面表征的室內(nèi)用白光LED光生物安全研究
對(duì)室內(nèi)用白光LED光生物安全性痕量檢測(cè)方法進(jìn)行研究:結(jié)合本課題前期的成果,以熒光粉激發(fā)白光LED作為實(shí)驗(yàn)光源,以四種人體皮膚和眼睛細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,運(yùn)用MTT比色法對(duì)不同輻照時(shí)長(zhǎng)和不同輻照強(qiáng)度下的光生物安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)——細(xì)胞活力分別進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
對(duì)室內(nèi)用白光LED致人體細(xì)胞損傷機(jī)制進(jìn)行研究
以色溫為4000K熒光粉激發(fā)白光LED作為實(shí)驗(yàn)光源,以四種人體皮膚和眼睛細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,以皮膚細(xì)胞1h、眼睛細(xì)胞2h作為實(shí)驗(yàn)輻照時(shí)長(zhǎng),以60W/m2作為實(shí)驗(yàn)輻照強(qiáng)度,對(duì)光照處理后細(xì)胞內(nèi)氧化自由基（ROS）水平、細(xì)胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量、細(xì)胞外乳酸脫氫酶（LDH）含量、細(xì)胞凋亡程度、調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)分別進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
通過(guò)對(duì)上述兩個(gè)階段研究的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)地處理和分析,得出以下結(jié)果和結(jié)論:建立了一種可以直接、快速地反映室內(nèi)用白光LED光生物安全性的痕量檢測(cè)方法,用于檢測(cè)室內(nèi)用白光LED的早期、潛在危害性。
得出了室內(nèi)用白光LED致人體細(xì)胞損傷機(jī)制—細(xì)胞在受到實(shí)驗(yàn)光照處理后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,其代謝平衡被打破,通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用造成細(xì)胞膜損傷,通過(guò)上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2的表達(dá)水平和下調(diào)凋亡促進(jìn)基因Bax的表達(dá)水平誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（主要為JNK和p38途徑）亦參與其中,人永生化角質(zhì)細(xì)胞HaCat激活的途徑主要為p38;人晶狀體上皮細(xì)胞SRA01/04和人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞D407激活的途徑主要為JNK,而男性正常龜頭細(xì)胞系HS68中,ERK1/2、JNK和p38三者的活化程度均不顯著。
參考文獻(xiàn)
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