小鼠白介素-2 (IL-2)ELISA 試劑盒
( 用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內 )
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗小鼠 IL-2 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 IL-2與單抗結合，加入生物素化的抗小鼠 IL-2 ，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的 Streptavidin 與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在 450nm 處測 OD 值，IL-2 濃度與 OD 值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中IL-2 濃度。
試劑盒組成 （ 2-8 ℃保存）
酶標 板 （Coated Wells ） | 96 孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate ） | 12ml |
10 ×標本稀釋液（Sample Buffer ） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（ Wash Buffer ） | 50ml |
標準品 （Standards ） ： 20ng/瓶 | 2 瓶 | 底物工作液（TMB Solution ） | 12ml |
抗體工作液（ Biotinylated Antibody ） | 12ml | 終止液 （Stop Solution ） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反復凍融。
2. 標準品液配制：使用前加入1ml 蒸餾水 混勻，配成 2 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 2 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有 OD 值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應 IL-2 含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度 ： 最小的IL-2 檢測濃度小于 15 pg/ml。
2. 特異性： 可同時檢測重組或天然的小鼠 IL-2 。 不與 小鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內、板見變異系數均小于10％。
注意事項
1. 以上標準孔及待 測 樣品均建議做復孔，每次測定應同時 做 標準曲線。
2. 洗滌過程 很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及 OD 值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持 板條干燥 。
4. 本試劑盒宜置 4°C冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！