背景及概述^[1]

3-磷酸甘油醛脫氫酶，英文名(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPD)。3-磷酸甘油醛脫氫酶，它可以催化3-磷酸甘油醛氧化(脫氫)和磷酸化，生成1，3-二磷酸甘油酸，是糖代謝的中心環(huán)節(jié)，故對糖代謝起著重要的作用。3-磷酸甘油醛脫氫酶廣布于人體各組織器官，脂肪組織含量較低，肺含酶量約為脂肪組織的10倍，肝、心含量相近，約為脂肪組織的30倍，以骨骼肌、紅細胞和腎中的含量最為豐富。急性肝炎、酒精性肝病、肝硬變等可致血清GAPD總活性升高。慢性腎盂腎炎、多發(fā)性骨髓病、肺炎、肺氣腫等病人血清 GAPDA活性呈不同程度的升高。3-磷酸甘油醛脫氫酶的應(yīng)用前景十分廣闊，它是糖代謝的中心環(huán)節(jié)，對糖代謝起著重要的作用，而對于體內(nèi)缺乏此酶，糖代謝有問題的病人，通過食用含有此酶的藥物，可以使病情得以緩解，治療。該酶還分布于人體各組織器官故通過對3-磷酸甘油醛脫氫酶的活性檢測就可以推斷是否患有此類病，對于疾病的預(yù)防有著很大作用。

制備^[1]

CN201711376257.7提供一種3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體。得到了來源于細菌中的3-磷酸甘油醛脫氫酶，而且該3-磷酸甘油醛脫氫酶具有低溫酶的特性，制備得到3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體，能夠準確檢測3-磷酸甘油醛脫氫酶。本發(fā)明的目的之一是提供一種3-磷酸甘油醛脫氫酶的氨基酸序列；所述3-磷酸甘 油醛脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明的目的之二是提供一種編碼3-磷酸甘油醛脫氫酶基因的堿基序列；所述3-磷酸甘油醛脫氫酶基因的堿基序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明的目的之三是提供一種3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體制備方法。包括以下步驟：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3-磷酸甘油醛脫氫酶為抗原，免疫小鼠制備抗血清；2)純化抗血清得到3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體。進一步地，所述3-磷酸甘油醛脫氫酶的制備方法為：1.1)利用PCR技術(shù)擴增SEQ ID NO.2所示的堿基序列；1.2)將SEQ ID NO.2所示的堿基序列克隆入載體質(zhì)粒中，構(gòu)建3-磷酸甘油醛脫氫 酶的表達載體；1.3)將表達載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)菌體中得到重組菌體，依次經(jīng)擴大培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達、收集菌體、破碎菌體和純化蛋白過程得到3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白。圖3為重組菌株Ecoli BL21-pET21a-GPR表達3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白的聚丙烯 酰胺凝膠電泳鑒定圖；其中M泳道為protein marker；1號泳道為3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白；

主要參考資料

[1] CN201711376257.7 3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體