背景[1][2][3]
AIF抗體中的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子AIF是一種黃素蛋白。細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子通過引起DNA片段化和染色質(zhì)濃縮參與啟動(dòng)不依賴于胱天蛋白酶的凋亡途徑（細(xì)胞凋亡的正內(nèi)在調(diào)節(jié)劑）。它還可作為NADH氧化酶。另一種AIF功能是調(diào)節(jié)線粒體膜對細(xì)胞凋亡的滲透性。通常它位于線粒體外膜后面，因此與細(xì)胞核隔離。然而，當(dāng)線粒體受損時(shí)，它會(huì)移動(dòng)到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。
AIF的失活導(dǎo)致胚胎干細(xì)胞在生長因子停止后對死亡的抗性，表明其參與凋亡。細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）是一種蛋白質(zhì)，可觸發(fā)細(xì)胞中的染色質(zhì)濃縮和DNA片段化，從而誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。發(fā)現(xiàn)線粒體AIF蛋白是半胱天冬酶細(xì)胞凋亡效應(yīng)器，可以讓細(xì)胞核經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的變化。
當(dāng)線粒體釋放AIF時(shí)，觸發(fā)細(xì)胞凋亡的過程開始，AIF通過線粒體膜離開，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，最后終止于細(xì)胞核，在細(xì)胞核中，它向細(xì)胞發(fā)出信號，凝聚其染色體并分裂其DNA分子，以便為細(xì)胞做準(zhǔn)備死亡。最近，研究人員發(fā)現(xiàn)AIF的活性取決于細(xì)胞類型，凋亡損傷及其DNA結(jié)合能力。AIF還在線粒體呼吸鏈和代謝氧化還原反應(yīng)中起重要作用。
AIF抗體(兔多抗)是通過分子生物學(xué)方法構(gòu)建了重組AIF的表達(dá)載體,并誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)AIF的大量表達(dá)。該重組蛋白以可溶性形式存在,經(jīng)親和柱純化后對家兔進(jìn)行免疫,得到AIF抗體(兔多抗)。AIF刺激機(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。
一般而言，抗體按靶位點(diǎn)不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體 ，由多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結(jié)合的抗體就是多克隆抗體。多抗一般制備流程：完全抗原的準(zhǔn)備→兔子的免疫→ 效價(jià)檢測和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。
臨床應(yīng)用[5]
在研究腫瘤的抗凋亡機(jī)制中AIF抗體可用免疫組化檢測樣本中AIF的表達(dá)水平。凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosisinducingfactor, AIF)在胃癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法:用免疫印跡法檢測 AIF在細(xì)胞中的表達(dá)量;用免疫組化法檢測。
組織標(biāo)本制成蠟塊后,4μm連續(xù)切片,60℃烤片過夜。以二甲苯脫蠟,酒精水化后,予PBS沖洗3次,每次5min。用枸櫞酸鹽高壓修復(fù)組織抗原,然后用3%過氧化氫溶液室溫孵育15min,予PBS沖洗3次,每次5min。用正常兔血清室溫封閉15min,滴加AIF一抗(1:200),濕盒內(nèi)37℃孵育2h后;滴加生物素標(biāo)記的兔抗山羊IgG二抗,濕盒內(nèi)37℃孵育15min;再滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素,濕盒內(nèi)37℃孵育15min。
DAB顯色,蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作空白對照。細(xì)胞內(nèi)見棕褐色顆粒者為 AIF表達(dá)陽性細(xì)胞。 每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取 10個(gè)視野, 按陽性細(xì)胞占同類細(xì)胞總數(shù)的百分比來計(jì)算。 ≤5%為陰性(-), 6%-29%為低表達(dá)(+), 30% -60%為表達(dá)陽性(++), 61%-100%為表達(dá)強(qiáng)陽性(+++)。
參考文獻(xiàn)
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