背景技術(shù)

多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)。它是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物，由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結(jié)合而成。多肽的全合成不僅具有很重要的理論意義，而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值。通過多肽全合成可以驗(yàn)證多肽的結(jié)構(gòu)；設(shè)計(jì)新的多肽，用于研究結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系；為多肽生物合成反應(yīng)機(jī)制提供重要信息；建立模型酶以及新的多肽藥物等。多肽合成已成為最活躍的生化科技領(lǐng)域之一。目前，多肽主要采用固相合成法為主。

在合成多肽過程中，氨基酸的活性基團(tuán)必須先加以保護(hù)，反應(yīng)完成后再將保護(hù)基團(tuán)除去。1978年，Chang Meienlofer和Atherton等人采用Carpino報(bào)道的9-芴甲氧羰基(簡稱Fmoc)作為氨基保護(hù)基。Fmoc基對(duì)酸很穩(wěn)定，但能用哌啶-二氯甲烷或哌啶-二甲基甲酰胺脫去?，F(xiàn)在，F(xiàn)moc固相合成多肽法已得到廣泛的應(yīng)用。9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺(簡稱Fmoc-ONSu)正是提供Fmoc基團(tuán)最有效的一種試劑。

正如Paul B.W.等人在文獻(xiàn)Int.J.Peptide Protein Res.27，1986，398-400中所闡述的，F(xiàn)moc-ONSu的合成方法普遍采用Fmoc氯甲酸酯與琥珀酰亞胺在二氧六環(huán)溶劑中、在三乙胺等有機(jī)堿存在下進(jìn)行反應(yīng)。但用該法合成的產(chǎn)品Fmoc-ONSu在二氧六環(huán)溶劑中溶解度大，二氧六環(huán)和三乙胺等不能完全回收，對(duì)環(huán)境有污染；并且三乙胺等有機(jī)堿的存在使產(chǎn)品較易分解，從而使產(chǎn)品難以精制純化，收率較低，純度偏低，不宜直接用于保護(hù)氨基酸的合成，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

美國專利US5426190提出一種由羥胺和丁二酸酐反應(yīng)生成琥珀酰亞胺，不經(jīng)分離直接在氫氧化鈉存在下與Fmoc氯甲酸酯反應(yīng)合成Fmoc-ONSu，但在實(shí)施過程中反應(yīng)產(chǎn)生的琥珀酰亞胺數(shù)量較難確定，同時(shí)，原料Fmoc氯甲酸酯和產(chǎn)品芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺在氫氧化鈉存在下較易水解，使得收率不高，產(chǎn)品純度較低，不易于工業(yè)化生產(chǎn)。

合成工藝

50L搪瓷反應(yīng)釜，加入15kg醋酸乙酯和5.0kg Fmoc-Cl(19.38mol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌溶解。加入預(yù)先配制好的HOSu(2.34kg，20.35mol)的水溶液25kg，常溫下攪拌，1小時(shí)內(nèi)分批加入固體碳酸鈉1.1kg(注意：加入碳酸鈉時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量氣泡)。攪拌反應(yīng)2小時(shí)后過濾分出濾液，固體用醋酸乙酯洗滌，得Fmoc-ONSu粗品5.35kg，收率82％，熔點(diǎn)144.0～147.0℃。精制后，熔點(diǎn)147.0～149.0℃。

過濾出的濾液經(jīng)靜置分層，水相分離，有機(jī)相與洗滌液合并，TLC顯示該溶液含有部分Fmoc-ONSu和少量未反應(yīng)完全的Fmoc-Cl。

反應(yīng)中，F(xiàn)moc-Cl與HOSu的物質(zhì)的量之比為1∶1.05。