花生四烯酸乙醇胺是人類發(fā)現(xiàn)的個(gè)內(nèi)源性大麻素類似物，近年來(lái)，關(guān)于花生四烯酸乙醇胺含量的改變和疾病之間的關(guān)系的文獻(xiàn)報(bào)道越來(lái)越多，有研究者認(rèn)為，大麻受體內(nèi)源性主要配體花生四烯酸乙醇胺在許多疾病中可能扮演了疾病前兆性指示物或疾病發(fā)生標(biāo)志物的角色。

目前對(duì)脂肪酸單乙醇酰胺的功效、生物代謝途徑的研究大多基于體內(nèi)提取，含量低，處理復(fù)雜。若能夠進(jìn)行體外合成，并對(duì)其進(jìn)行富集純化得到較高純度的花生四烯酸乙醇胺，不僅有利于科學(xué)基礎(chǔ)研究，還將有望應(yīng)用于藥物治療。

根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物合成途徑的不同，其分離提純的方法也存在差異。采用油脂法制備花生四烯酸乙醇胺的方法具有原料來(lái)源廣泛，設(shè)備投資少，適合工業(yè)化的特點(diǎn)。但反應(yīng)的粗產(chǎn)物中除了包含反應(yīng)生成的副產(chǎn)物甘油和未發(fā)生反應(yīng)的單乙醇胺外，還含有較多的其他飽和或不飽和的脂肪酸乙醇酰胺。

純化方法

這種花生四烯酸乙醇胺的純化方法包括，制備混合脂肪酸乙醇酰胺；利用尿素分離不同飽和度的脂肪酸單乙醇酰胺；減壓過(guò)濾分離固液兩相得到濾液；所述濾液經(jīng)萃取濃縮后得到富含花生四烯酸乙醇胺的不飽和脂肪酸單乙醇酰胺。

作為本發(fā)明所述純化方法的一種優(yōu)選方案，其中：

制備混合脂肪酸單乙醇酰胺的原料為微生物藻油和單乙醇胺，所述微生物藻油中花生四烯酸含量以質(zhì)量百分比計(jì)占30％～40％；

所述微生物藻油和單乙醇胺按照摩爾比為1:1～1:30進(jìn)行混合；

在所述微生物藻油和單乙醇胺混合之后，還包括，添加反應(yīng)底物總質(zhì)量的0.1～0.5％的堿性催化劑，所述堿性催化劑為甲醇鈉的甲醇溶液；

在添加反應(yīng)底物總質(zhì)量的0.1～0.5％的堿性催化劑之后，還包括，添加正己烷、無(wú)水乙醇或兩者的混合溶液，在25～60℃下攪拌反應(yīng)0.5～6h；

所述利用尿素分離不同飽和度的脂肪酸單乙醇酰胺，包括，按照體積和質(zhì)量比，95％乙醇：尿素＝2～8：1分別取95％乙醇和尿素，60～75℃水浴中加熱回流至尿素完全溶解，再按照質(zhì)量比混合脂肪酸乙醇酰胺：尿素＝1：2～6加入反應(yīng)粗產(chǎn)物，繼續(xù)加熱回流至澄清透明，得到混合脂肪酸單乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液；

在得到混合脂肪酸單乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液之后，還包括，將所得混合脂肪酸乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液冷卻至室溫，靜置于-40℃～10℃條件下低溫結(jié)晶6h～24h，然后減壓抽濾分離，收集濾液，得到富含花生四烯酸乙醇胺的多不飽和脂肪酸單乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液；

在得到富含花生四烯酸乙醇胺的多不飽和脂肪酸單乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液之后，還包括，將所得多不飽和脂肪酸單乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液加入無(wú)水乙醚和55～75℃熱水，萃取，分離合并有機(jī)相，干燥減壓濃縮，得到液體油狀物，去除溶劑，即得到純度在45％～65％的花生四烯酸乙醇胺產(chǎn)品；

所述干燥，采用無(wú)水Na2SO4進(jìn)行干燥；

在所述萃取之后，分離合并有機(jī)相之前，還包括，得到水相為尿素溶液，經(jīng)一次低溫結(jié)晶，濾液濃縮后二次結(jié)晶可得到尿素晶體回收干燥利用。

本發(fā)明以富含花生四烯酸的微生物藻油作為合成花生四烯酸乙醇胺的?；w，采用尿素對(duì)反應(yīng)后的混合脂肪酸單乙醇酰胺粗產(chǎn)物進(jìn)行純化，該方法具有操作簡(jiǎn)便、成本低、試劑與尿素易得且可回收利用，反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn)，為進(jìn)一步富集純化高純度的花生四烯酸乙醇胺提供參考價(jià)值。