小鼠腹腔巨噬細胞的主要獲取方法^[1]

從小鼠腹腔提取，現(xiàn)有的提取方法有兩種，一種是直接腹腔灌洗后貼壁培養(yǎng)；另一種是先向小鼠腹腔內(nèi)注射刺激物制造無菌炎癥環(huán)境以積聚巨噬細胞，再灌洗腹腔獲取細胞并貼壁培養(yǎng)。直接灌洗腹腔所得的細胞數(shù)量甚少，并不是理想的提取方法。以炎癥刺激巨噬細胞聚集再灌洗所得的細胞一直以來被認為是炎性甚至變異的，而對于上述兩種方法提取的小鼠腹腔巨噬細胞之間的生物學差異有待進一步研究。

３％巰基乙酸鹽肉湯誘導法高效提取小鼠腹腔巨噬細胞

方法：

選取 3２只健康昆明小鼠，隨機分為 ４組，每組 ８只，分別采用以下 ４種不同方法獲得腹腔巨噬細胞：ＰＢＳ直接灌洗小鼠腹腔（ＰＢＳ組）；含 １０％血清的 ＲＰＭＩ１６４０培養(yǎng)液注入小鼠腹腔，３０ｍｉｎ后灌洗小鼠腹腔（培養(yǎng)液組）；６％淀粉肉湯注入小鼠腹腔，每天 １次，３ｄ后以 ＰＢＳ灌洗腹腔（淀粉肉湯組）；３％巰基乙酸鹽肉湯注入小鼠腹腔，每天 １次，３ｄ后以ＰＢＳ灌洗腹腔（巰基乙酸鹽組）；將各組所獲細胞分別轉(zhuǎn)入含 １０％血清的 ＲＰＭＩ１６４０培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)，比較細胞形態(tài)、數(shù)量、吞噬能力、純度以及活性。

?；撬釋π∈蟾骨痪奘杉毎δ苷{(diào)節(jié)作用^[2]

方法：

收集小鼠腹腔巨噬細胞, 調(diào)整細胞濃度為2×105/mL, 分為5組, 即正常對照組, LPS對照組 (LPS終濃度為1μg/mL) 和低、中、高?；撬釀┝拷M (牛磺酸的終濃度分別為5、50和500μg/mL) , 培養(yǎng)24 h后ELISA法檢測細胞上清中IL-12、TNF-α、IL-1、IL-6含量;瑞氏染色法檢測并計算巨噬細胞對白色葡萄球菌的吞噬率和吞噬指數(shù)、Griess法檢測吞噬葡萄球菌后細胞上清中NO的含量。結果 各劑量牛磺酸組的腹腔巨噬細胞TNF-α和IL-6含量均高于正常對照組 (P <0. 05) , 高劑量?；撬峤MIL-12的含量高于對照組 (P <0. 05) , 各劑量的牛磺酸組IL-1含量與對照組比較沒有統(tǒng)計學意義;中、高劑量的?；撬峤M巨噬細胞對葡萄球菌的吞噬率、吞噬指數(shù)和上清中NO的含量均高于正常對照組 (P <0. 05) 。

參考文獻

[1] 耿田欣，臧光耀，嚴金川．３％巰基乙酸鹽肉湯誘導法高效提取小鼠腹腔巨噬細胞［Ｊ］．江蘇大學學報（醫(yī)學版），２０１９，２９（１）：４５－４８

[2] 牛磺酸對小鼠腹腔巨噬細胞功能調(diào)節(jié)作用的體外研究.王亞敏