合成工藝

司美格魯肽現(xiàn)有的合成工藝，包括原研選擇的生物發(fā)酵結(jié)合化學(xué)合成的方法完成產(chǎn)品的制備方法(CN101910193)。采用此方法合成，生物發(fā)酵方法制備 GLP-1(11-37)片段之后，N-末端氨基和Ser、Thr和Tyr側(cè)鏈的羥基均沒有進行保護，直接和側(cè)鏈的OSu酯進行反應(yīng)，容易導(dǎo)致多位點的反應(yīng)，形成大量非預(yù)期的雜質(zhì)，不利于后期的分離純化，收率也比較低。

司美格魯肽現(xiàn)有的合成工藝，還包括一些傳統(tǒng)的多肽固相合成以及片段縮合的合成方法(CN 103848910、CN 106928343、CN106478806、WO2016046753 等)。在所有的這些各種方法，采用線性偶聯(lián)的方法，基本上很難有好的合成效果，主要是司美格魯肽本身的多肽序列結(jié)構(gòu)，N-末端片段： H-His1-Aib2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Val10-Ser11-Ser12-Tyr13-Leu14-，因為較強的疏水性，容易形成β-折疊等二級結(jié)構(gòu)，偶聯(lián)非常困難，縮合效率很低。而一些片段縮合的方法，也是為了解決線性偶聯(lián)困難的問題。但是，目前一些片段縮合的方法，當(dāng)合成規(guī)模放大到生產(chǎn)之后，片段的溶解問題，片段的偶聯(lián)效率問題，還有片段溶解的放熱問題等，都會影響最后的合成效果。另外，片段縮合在操作上也比較復(fù)雜，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

CN112321699A公開一種司美格魯肽的合成方法，包括如下步驟：

(1)把離子液體Linker偶聯(lián)到固相樹脂上；

(2)根據(jù)司美格魯肽C-末端的個氨基酸Gly，把Fmoc-Gly-OH偶聯(lián)到上述含有離子液體Linker的固相樹脂上；

(3)脫除Fmoc保護基，根據(jù)司美格魯肽的序列，按照偶聯(lián)Fmoc或Boc 保護α氨基的氨基酸或肽段，然后脫除Fmoc保護基的方法依次進行偶聯(lián)，F(xiàn)moc 或Boc保護α氨基的氨基酸的偶聯(lián)順序為：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、 Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH；

(4)脫除Lys(Alloc)中的Alloc保護基團；

(5)根據(jù)司美格魯肽的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，偶聯(lián)Fmoc-AEEA-OH，然后以脫除Fmoc 保護基，然后依次偶聯(lián)Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu-OtBu和十八烷二酸單叔丁酯；

(6)裂解樹脂和側(cè)鏈保護基得到粗肽；

(7)純化后得到司美格魯肽精肽。

上述步驟(1)中所說的離子液體Linker，包括咪唑乙醇四氟硼酸離子液體；咪唑乙醇六氟磷酸離子液體；咪唑乙醇三氟甲磺酸離子液體；咪唑丙醇六氟磷酸離子液體；咪唑丙醇四氟硼酸離子液體；咪唑丙醇三氟甲磺酸離子液體；咪唑乙醇雙三氟甲基磺酰亞胺液體；咪唑丙醇雙三氟甲基磺酰亞胺離子液體等。