背景及概述^[1][2]

中藥前胡為傘形科植物白花前胡(Peucedanum praeruptrum Dunn)或紫花前胡(P. decursivum maxim)的干燥根，具有散風(fēng)清熱，降氣化痰的功效，作為止咳化痰平喘藥而廣 泛應(yīng)用。白花前胡甲素(dl-praeruptorin A，Pd-Ia)為白花前胡根中提取出的一種角型吡 喃香豆素，是白花前胡的主要有效成分，呈白色針尖狀結(jié)晶，脂溶性，易溶于有機溶劑中。

近年來藥理研究表明，Pd-Ia作為一種鈣通道阻滯劑和鉀通道開放劑，具有保護(hù)心肌缺血和局灶性腦缺血急性損傷的作用；Pd-Ia可作為一種新型藥物，對心血管及呼吸系統(tǒng)疾病，特別是冠心病的臨床治療及預(yù)防有潛在且廣闊的應(yīng)用前景。具有劑量小、療效顯著、毒副作用小的特點。

結(jié)構(gòu)

作用和用途^[2]

1）白花前胡甲素(Pd-Ia)對氣管平滑肌的作用研究：白花前胡甲素有舒張腸管平滑肌作用和鈣拮抗作用。研究Pd-Ia 對對高鉀，乙酰膽堿預(yù)收縮的離體家兔氣管 平滑肌的作用。結(jié)果表明，白花前胡甲素對高鉀及乙酰膽堿(Ach)誘發(fā)的家兔氣管平滑肌有較強的松馳作用。尤其對高鉀收縮的松馳作用比較強。高鉀使氣管平滑肌膜去極化，引起電位依幀性鈣通 (PDC)開放，鈣跨膜內(nèi)流導(dǎo)致平滑肌收縮。

Pd-Ia 對高鉀收縮的較強抑制作用，提示其可能具有對 PDC 選擇性的阻滯作用。白花前胡甲素對氣管平滑肌的松弛作用與維拉帕米(Ver)相似，其作用機制可考慮為對高鉀誘發(fā)收縮反應(yīng)的較強抑制作用與抑制 PDC 有關(guān)；而對乙酰膽堿(Ach)誘發(fā)收縮反應(yīng)的抑制作用與抑制細(xì)胞內(nèi) Ca2+釋放有關(guān)。

2）白花前胡甲素(Pd-Ia)對心肌細(xì)胞的作用研究：采用放免法檢測急性缺血再灌注大鼠血清白細(xì)胞介素(IL-6) 水平，研究了 Pd-Ia 抗缺血再灌注損傷的機制，認(rèn)為 Pd-Ia 對缺血再灌注 大鼠血清 IL-6 水平有明顯抑制作用，其高劑量組作用強度大致與硝苯地平相近。

推測 Pd-Ia 可能通過鈣拮抗或 K+通道開放作用抑制氧自由基形成，進(jìn)一步抑制氧自由基能激活核轉(zhuǎn)錄因子—kB(NF—kB)激活途徑而達(dá)到降低 缺血再灌注大鼠血清中 Pd-Ia 水平及減輕中性粒細(xì)胞浸潤程度。用細(xì)胞膜片鉗制方法觀察了中藥白花前胡有效成分白花前胡甲素(Pd-Ia)對豚鼠心室肌單細(xì)胞遲發(fā)性外向鉀電流(Ik)的影響。

Pd-Ia 以劑量依賴的方式增加鉀電流(Ik)，其濃度接近 l nmo1.L-1，EC50 約 0.2.nmol•L-1，效應(yīng)濃度約為 1μmol.L-1，增加鉀電流(Ik)2. 5±0.5 倍(P＜0.01)，Pd-Ia 的此種作用通過沖洗可部分消退。從電流---電壓關(guān)系可知：的激活電壓接近-40 mV.1μmol•L Pd-Ia 使 V1/2左移 7mV，曲線的斜率改變-0.65 mV，經(jīng)比較無統(tǒng)計學(xué)意義，提示 Pd-la 對鉀電流(Ik)的激活動力學(xué)過程無明顯影響。

結(jié)果表明，Pd-la 能促進(jìn) K＋ 通道開放。探討白花前胡甲素(Pd-Ia)對 Ang II 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大及核轉(zhuǎn)錄因子 c-Jun 蛋白表達(dá)水平的影響。方法：體外原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測核轉(zhuǎn)錄因子 c-Jun 蛋白表達(dá)情況；[3 H]亮氨酸摻 入法及[3 H]胸腺嘧啶核苷摻入法檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白、DNA 合成。

結(jié)果顯示AnglI(10-6mol•L-1 )刺激心肌細(xì)胞 2h 后，細(xì)胞核內(nèi) c-Jun 蛋白表達(dá)顯著增強。為對照組的 2.8 倍(P＜0.01)；24h 后，細(xì)胞內(nèi) DNA、蛋白合成顯著增加(P＜0.05)。Pd-Ia 對此有顯著抑制作用(P＜0.05)。認(rèn)為 Pd-Ia 能夠拮 抗 An I 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，其機制可能與抑制 Ang II 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞 c-Jun 蛋白表達(dá)上調(diào)有關(guān)。

藥代動力學(xué)^[3]

以香豆素為內(nèi)標(biāo)物建立LC-MS分析方法，色譜柱為Hypersil ODS2柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇-水-乙酸（75：25：0.1），流速為1000μL·min^-1，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為30μL。采用電噴霧電離源，選擇反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式進(jìn)行正離子檢測。給健康雄性Wistar大鼠靜脈注射和口服灌胃白花前胡甲素5mg·kg^-1后用所建立的LC-MS法測定不同時間的血漿藥物濃度，并采用WinNonlin藥物動力學(xué)軟件中非房室模型分析方法對血藥濃度-時間數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

以華蟾毒精為內(nèi)標(biāo)物，采用Hypersil-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，以甲醇-水（75：25）為流動相，流速1000μL·min^-1，檢測波長321 nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量20μL。超速離心法制備大鼠肝微粒體，HPLC法測定孵育液中白花前胡甲素原形藥物的濃度，研究白花前胡甲素的酶促動力學(xué)，同時觀察不同濃度肝微粒體蛋白對白花前胡甲素代謝的影響，并采用透析法研究白花前胡甲素的血漿蛋白結(jié)合率。

結(jié)果顯示LC-MS檢測白花前胡甲素在大鼠血漿中的濃度，其檢測限為1 ng·mL^-1，白花前胡甲素濃度在1～1000 ng·mL^-1范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0.9999）；準(zhǔn)確度為92.2%～106.0%；日內(nèi)、日間精密度分別為2.1%～8.2%、2.8%～5.9%。靜脈注射白花前胡甲素5 mg·kg^-1的藥動學(xué)參數(shù)：t_1/2：（10.71±0.27）h；CL：（1.09±0.04）L·h^-1；V_Z：（16.78±0.95）L；AUC_inf：（1152.40±46.86）ng·（h·mL）^-1。口服灌胃Pd-Ia 5 mg·kg^-1的藥動學(xué)參數(shù)：t_1/2：（9.94±1.27）h；CL：（1.51±0.14）L·h^-1；V_Z：（21.57±0.83）L；AUC_inf：（828.95±74.47）μg·（h·mL）^-1。

HPLC法檢測白花前胡甲素，濃度在1～100μg·mL^-1范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0.9989），日內(nèi)RSD為2.3%～7.4%；日間RSD為8.0%～14.5%；萃取回收率為98.4%；白花前胡甲素在肝微粒體中呈線性消除，消除速率不隨藥物底物濃度的增加而增加，t_1/2為（41.74±10.71）min；C_max為（57.22±3.27）μg·mL^-1；CL為（0.0034±0.0199）mL·（min·mg）^-1。白花前胡甲素與大鼠血漿蛋白的結(jié)合率范圍為80.23%～92.83%。結(jié)論本文建立的LC-MS方法操作簡單、靈敏、特異，結(jié)果準(zhǔn)確，適合用于白花前胡甲素大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究。白花前胡甲素吸收慢，生物利用度高。

制備 ^[4]

利于大生產(chǎn)操作、產(chǎn)品純度高的白花前胡甲素的制備方法。采用下列技術(shù)方案：取白花前胡全草粗粉，加入到CO2超臨界萃取器中，萃取壓力10-40MPa，溫度30-60℃，CO2流量1-5ml/g生藥/min，萃取時間150-250min，得萃取物，得油狀物，冷藏，析出結(jié)晶，分離結(jié)晶，石油醚洗滌，加入無水乙醇重結(jié)晶，分離、洗滌、干燥即得。

主要參考資料

[1] CN201310726365.8 白花前胡甲素微乳及其制備方法

[2] 白花前胡甲素的藥理作用研究進(jìn)展

[3] 白花前胡甲素的藥代動力學(xué)研究

[4] CN200910233828.0 一種白花前胡甲素的制備方法