人肝癌細(xì)胞分離自患有肝癌病人的肝癌組織；肝癌即肝臟惡性腫瘤，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。

細(xì)胞特性

來源：肝癌組織

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細(xì)胞處理

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

一種人肝癌細(xì)胞系及其用途

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對現(xiàn)有的人肝癌細(xì)胞系存在的生物多樣性低，與臨床上肝癌的生物學(xué)性狀相差較大的不足，而提供一種新的人肝癌細(xì)胞系及其制備方法和用途。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種人肝癌細(xì)胞，其保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C201072。

本發(fā)明還提供如上所述的人肝癌細(xì)胞的子代細(xì)胞。

本發(fā)明還提供如上所述的人肝癌細(xì)胞的用途，用于在哺乳動物中產(chǎn)生肝癌。所述的哺乳動物可以是各種哺乳動物，優(yōu)選裸小鼠。所述的裸小鼠優(yōu)選BALB/c裸小鼠。所述的肝癌優(yōu)選低分化或中分化肝細(xì)胞癌。所述的肝癌是癌細(xì)胞基因組中有乙肝病毒DNA整合的肝癌。

本發(fā)明還提供一種上述人肝癌細(xì)胞系的建立方法，包括以下步驟，

1)獲得新鮮的臨床肝癌手術(shù)切除標(biāo)本，切成20～50mg的小塊，皮下穿刺接種哺乳動物；

2)穿刺接種70～90天后，將荷瘤動物處死，取出腫瘤組織，進(jìn)行癌細(xì)胞的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。

其中，所述的哺乳動物、所述的肝癌都如上所述。

所述的新鮮的臨床肝癌手術(shù)切除標(biāo)本較佳的用哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)液或生理鹽水漂洗后再進(jìn)行接種。較佳的用新鮮的HBSS緩沖液(含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸鏈霉素和1.25μg/ml兩性霉素B)漂洗。

所述的接種的方式可以是皮下穿刺接種，原位接種或者腎囊膜內(nèi)接種。對于肝癌較佳的是進(jìn)行皮下穿刺接種。

所述的原代培養(yǎng)方法可以是常規(guī)的哺乳動物細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法。較佳的包括以下步驟：將腫瘤組織剪切成小塊，置入培養(yǎng)瓶中，于37℃孵箱5％CO2條件下培養(yǎng)；次日，將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放，向瓶內(nèi)加入DMEM/F12培養(yǎng)液(含10ng/ml重組人表皮生長因子，10μg/ml重組人胰島素，6.7ng/ml亞硒酸鈉，5.5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白，2μg/ml乙醇胺，0.1％牛血清白蛋白，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸鏈霉素和0.25μg/ml兩性霉素B)，靜置培養(yǎng)；

所述的傳代培養(yǎng)方法可以是常規(guī)哺乳動物細(xì)胞的傳代培養(yǎng)方法。較佳的包括以下步驟：吸棄舊培養(yǎng)液，向瓶中加入新鮮的0.05％胰蛋白酶溶液，待細(xì)胞脫落后，加入新鮮的DMEM/F12培養(yǎng)液，仔細(xì)吹打，使之脫離瓶壁形成細(xì)胞懸液；少量在瓶壁上變圓但沒有脫落的細(xì)胞，用無菌細(xì)胞刮刀輕輕掛擦培養(yǎng)瓶表面，收集全部細(xì)胞，離心，分別接種于新的培養(yǎng)瓶；當(dāng)細(xì)胞傳代到第五代以后，將培養(yǎng)液更換為RPMI 1640培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，10μg/ml重組人胰島素，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸鏈霉素和0.25μg/ml兩性霉素B)。

參考文獻(xiàn)

CN102465113A