重組人超氧化物歧化酶是一種廣泛存在于生物體內(nèi)，能清理生物體內(nèi)的超氧陰離子自由基(O2-)，維持機體中自由基產(chǎn)生和清理動態(tài)平衡的一種金屬酶。

特點

重組人超氧化物歧化酶與人體內(nèi)天然存在的SOD序列相同，具有更高的人體親和力。

生產(chǎn)方法

市場上流通的SOD大多是從動物血液中提取的，容易受到污染，產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素，引起熱源性問題，研制開發(fā)重組人超氧化物歧化酶不僅可解決人源SOD來源有限和因血制品污染而帶來的安全性問題，而且可避免異源SOD在臨床應(yīng)用時可能出現(xiàn)的免疫性過敏反應(yīng)。傳統(tǒng)的SOD純化方法較繁瑣且費時費力，SOD產(chǎn)率較低、生產(chǎn)成本昂貴，不利于大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)。因此開發(fā)其他更安全、更經(jīng)濟的提取或分離方法取代傳統(tǒng)SOD生產(chǎn)方法具有十分重要的意義。本發(fā)明將含有人源SOD基因的工程菌進行發(fā)酵表達(dá)，高壓勻質(zhì)破碎后進行熱變性，離心超濾后進行層析，克服了以現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，可滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需要。

本發(fā)明涉及一種重組人源超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法。屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。該方法利用銅鹽熱變性除去大部分雜蛋白，離心后經(jīng)過微濾除菌及雜質(zhì)，利用超濾進行濃縮、除鹽及小分子雜蛋白，陰離子層析純化后，冷凍干燥。操作簡單，成本低廉，適用于工業(yè)生產(chǎn)。 

具體操作步驟為： 

(1)將含有人源超氧化物歧化酶基因的大腸桿菌進行發(fā)酵，發(fā)酵液用管式離心機離心，轉(zhuǎn)速：16000r/min，流速：0.6-0.8mL/min，收集菌體，按照菌體濕重與純水體積1∶10比例懸浮，用高壓勻質(zhì)機破碎，破碎壓力為880bar，破碎一次； 

(2)在破碎后混合液中加入2％-6％體積的10mmol/L的CuCl2溶液，通入螺旋管加熱器中進行熱變性，熱變性溫度65-80℃，時間：10-30min。離心，收集上清； 

(3)膜處理，將步驟2所得上清液依次通過5μm的預(yù)處理膜、0.22μm濾膜、6kDa超濾膜； 

(4)DEAE-SephadexA50柱層析，用2.5-50mmoL/L的pH 7.6的磷酸鉀鹽緩沖液進行 梯度洗脫，收集具有SOD活力的洗脫液，超濾濃縮后，冷凍干燥，用鄰苯三酚自氧化法測定SOD活性。 

參考文獻(xiàn)

CN103627683A