背景技術(shù)
長(zhǎng)春花是夾竹桃科長(zhǎng)春花屬一種重要的藥用植物，原產(chǎn)南亞，非洲東部及美洲熱帶。我國(guó)西南、中南及華東等地現(xiàn)已有栽培。長(zhǎng)春花中含有很多有價(jià)值的吲哚類生物堿，其中長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿是臨床廣泛應(yīng)用的抗腫瘤藥物，具有獨(dú)特的藥理活性，而長(zhǎng)春質(zhì)堿和文多林既是合成長(zhǎng)春堿類藥物的原料，同時(shí)也具有藥用價(jià)值。國(guó)內(nèi)外對(duì)提取分離長(zhǎng)春堿的研究由來已久，由于長(zhǎng)春花全草中生物堿種類較多，而長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、去甲長(zhǎng)春堿在植物匯總的含量很低，一般都在萬分之幾，產(chǎn)能問題成為長(zhǎng)春類藥物的頸瓶。
長(zhǎng)春新堿屬雙吲哚生物堿類化合物，其作用靶點(diǎn)是微管，主要抑制微管蛋白的聚合而影響紡錘體微管的形成，使有絲分裂停止于中期；還可干擾蛋白質(zhì)代謝及抑制RNA多聚酶的活力，并抑制細(xì)胞膜類脂質(zhì)的合成和氨基酸在細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)。長(zhǎng)春新堿對(duì)移植性腫瘤的抑制作用大于長(zhǎng)春花堿且抗瘤譜廣，特別是對(duì)造血器官的腫瘤比較有效，在臨床醫(yī)學(xué)上作為抗癌劑之一而被應(yīng)用。
目前，國(guó)內(nèi)外研究合成長(zhǎng)春新堿的技術(shù)很多，雖然能得到長(zhǎng)春新堿，但都存在各種各樣的問題。
(1)現(xiàn)行合成硫酸長(zhǎng)春新堿的工藝，是以硫酸長(zhǎng)春總堿為原料合成的，一種是通過一步合成法即經(jīng)重鉻酸鈉氧化，得到長(zhǎng)春新堿，再經(jīng)繁瑣的純化過程，制備出高純度的長(zhǎng)春新堿，經(jīng)成鹽得到硫酸長(zhǎng)春新堿，該方法后處理很復(fù)雜，得到的收率很低，不適合進(jìn)行生產(chǎn)化；
(2)另一種是通過在低溫-70℃下與酸性氧化劑鉻酐反應(yīng)，生成長(zhǎng)春新堿和去甲長(zhǎng)春堿，再通過甲?；?，將去甲長(zhǎng)春堿轉(zhuǎn)化成長(zhǎng)春新堿，將得到的長(zhǎng)春新堿經(jīng)復(fù)雜的后處理——過硅膠或氧化鋁柱純化或多次重結(jié)晶等，得到高純度的長(zhǎng)春新堿，經(jīng)成鹽得到硫酸長(zhǎng)春新堿。該方法反應(yīng)轉(zhuǎn)化率低，后處理復(fù)雜，使得收率非常低，致使成本非常高，生產(chǎn)不具有可行性。
制備方法
一種硫酸長(zhǎng)春新堿的制備方法，包括以下步驟：
長(zhǎng)春總堿制備步驟：取長(zhǎng)春總堿硫酸鹽50g，加150ml純化水溶解，滴加氨水，調(diào)節(jié)pH值至9，再加入1000ml二氯甲烷分四次進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，去掉上層清液，將下層有機(jī)相濃縮至干，得長(zhǎng)春總堿I：48.5g。
甲?；磻?yīng)步驟：取上述長(zhǎng)春總堿I:48.5g，加至(預(yù)先冷卻至0～5℃)甲酸48.5g和乙酸酐24.5g的混合液中使溶解，于-5℃～0℃攪拌反應(yīng)60分鐘，再加入500ml冰水，再緩慢加入試劑氨水，調(diào)pH值至7～9，攪拌均勻后，用2500ml二氯甲烷分四次提取，合并提取液，用純化水洗至水層pH值呈中性，再加入100g無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑至干，得長(zhǎng)春總堿II：46.4g。
純化步驟：取上述長(zhǎng)春總堿II：46.4g，用80ml二氯甲烷溶解，備用。稱取470g 200～300目硅膠，采用濕法裝柱，裝好柱后，將樣品溶液上樣，流動(dòng)相為二氯甲烷：甲醇＝55：1混合溶液，進(jìn)行洗脫，控制洗脫流速約為45mL/min，分段收集，以薄層色譜檢測(cè)，當(dāng)出現(xiàn)長(zhǎng)春堿的點(diǎn)時(shí)，停止洗脫，同將洗脫液改為二氯甲烷：甲醇＝35:1，控制流速約為160mL/min，分段收集該段的流分，以薄層色譜檢測(cè)，合并含有長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新堿的流分，并濃縮至干，得到長(zhǎng)春總堿III：35g。
氧化反應(yīng)步驟：將上述長(zhǎng)春總堿III：35g用2400ml四氫呋喃溶解，加入至反應(yīng)釜中，攪拌下，開啟冷卻系統(tǒng)，將其冷卻至-65℃；
稱量重鉻酸鉀50.7g，加水3045ml水及100g硫酸，配制成硫酸重鉻酸鉀溶液；
當(dāng)反應(yīng)釜內(nèi)的溫度達(dá)到-65℃時(shí)，滴加配制好的硫酸重鉻酸鉀溶液，控制溫度為≤-60℃，滴畢后，于-60～-65℃反應(yīng)1h，取樣以薄層色譜法檢測(cè)，在與原料主斑點(diǎn)(長(zhǎng)春堿)相同比移值處無檢出斑點(diǎn)，反應(yīng)完畢；
滴加氨水調(diào)節(jié)pH值至8，加入2300ml純化水?dāng)嚢杌靹?，?500ml的乙酸乙酯分四次提取，合并提取液，用純化水洗至水層pH值呈中性，有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉100g濾過脫水，減壓回收溶劑至干，得長(zhǎng)春新堿：30.6g。
成鹽反應(yīng)步驟：取上述長(zhǎng)春新堿30.6g，加500ml的無水乙醇溶解，攪拌下加入10％硫酸無水乙醇(V硫酸：V無水乙醇＝1:9)溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.8～4.3(精密試紙檢測(cè))，停止滴加，將其降溫至-8℃，靜置24h，快速過濾，濾餅用少量無水乙醇洗滌2～3次，抽干，于60℃下減壓干燥，得硫酸長(zhǎng)春新堿成品：25.5g。
硫酸長(zhǎng)春新堿成品的收率為51％，經(jīng)HPLC分析，純度為97.0％，最大單雜為：1.3％。