3-氨基-4-氯苯甲酸是染料及醫(yī)藥生產的重要中間體，有關其合成方法，一般是由對氯苯甲酸硝化制得3-硝基-4-氯苯甲酸，再還原3-硝基-4-氯苯甲酸而得3-氨基-4-氯苯甲酸。有關3-氨基-4-氯苯甲酸含量分析，目前尚未見報道，而與此相關的HPLC法對苯甲酸衍生物的分離分析，僅局限于硝基苯甲酸與氨基苯甲酸的分離分析，本文建立了以液相色譜法分析3-氨基-4-氯苯甲酸含量的方法，簡便、易行、結果準確。

測定方法^[1]

1、儀器與試劑

3-氨基-4-氯苯甲酸標準品(上海試劑一廠實驗試劑，經自行重結晶,以液相色譜面積歸一法定量含量大于99.5%。);甲醇(色譜純);水(二次蒸餾水);磷酸(分析純)。

日本島津LC-6A高效液相色譜儀,SPD-6AV紫外可見檢測器,HS2000色譜數據工作站。

2、色譜條件

色譜柱:Kromasil C8(250mmx4.6mm,10um);流動相:甲醇-0.05%(ψ)磷酸水溶液(體積比 65:35);流速:1.2mL/min;柱溫:40°C;紫外檢測波長:254nm。

3、對照品溶液的制備

精密稱取3-氨基-4-氯苯甲酸對照品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取此溶液0.2.0.4.0.6.0.8.1.0 mL分別置于10mL容量瓶中,加甲醇稀釋定容。濃度為0.08.0.16.0.24.0.32.0.40g·L^-1對照品溶液。

4、供試品溶液的制備

精密稱取3-氨基-4-氯苯甲酸樣品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解,并稀釋至刻度,搖勻。精密吸取此溶液0.6mL置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋定容。

結果與討論

為了對3-氨基-4-氯苯甲酸進行快速準確的測定,該法對色譜柱,流動相,波長等條件進行了選擇。由于3-氨基-4-氯苯甲酸在甲醇中均有較好的溶解度,故采用反相色譜,色譜柱選用常用的C8柱,流動相選用甲醇與水。由于3-氨基-4-氯苯甲酸其結構中含有羧基顯一定的酸性,流動相選用甲醇與水,色譜峰明顯拖尾,為改善峰形,在水中加入一定量的磷酸。實驗中發(fā)現甲醇與酸性水溶液的比例,流動相中甲醇比例過高,所測物質保留時間過短,各物質之間達不到完全分離,隨著甲醇含量的不斷降低,保留時間越來越長,各物質之間分離也越來越完全。當甲醇占65%時,主峰、原料、中間體之間達到完全分離。檢測波長選常用的254nm,因主峰及有可能含有的有機雜質其結構中均有苯環(huán)存在,故選此波長[1]。

參考文獻

[1]張志蘭,丁元晨,項蘇留,等. HPLC法測定3-氨基-4-氯苯甲酸的含量[J]. 化學工程師,2004,18(4):28-29. DOI:10.3969/j.issn.1002-1124.2004.04.014.