簡(jiǎn)介

(R)-氟比洛芬是氟比洛芬的(R)型手性對(duì)映體，屬芳基丙酸類(lèi)化合物，化學(xué)名稱為(R)-2-(2-氟-4-聯(lián)苯基)丙酸，分子式C??H??FO?，因含手性碳原子而具有旋光性（比旋光度[α]?2?約+54°~+56°，c=1，乙醇中），通常為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，水中溶解性較差，堿性條件下可成鹽增加溶解度。

(R)-氟比洛芬

應(yīng)用

氟比洛芬(flurbiprofen)是一種非甾體類(lèi)消炎藥，為消旋體，其中S型能更有效地抑制環(huán)氧化酶(cyclooxygenase)，但其胃腸道不良反應(yīng)也更強(qiáng)。R型(1)雖無(wú)抗炎作用，但近期研究證明，(R)-氟比洛芬能抑制Aβ-42的表達(dá)，目前已進(jìn)入治療前列腺癌和阿爾茲海默病的Ⅲ期臨床研究。它還具有抗腫瘤活性，并且在體內(nèi)不會(huì)轉(zhuǎn)化為(S)-氟比洛芬。其藥理活性與(S)型存在差異，雖抗炎鎮(zhèn)痛活性較弱，但在神經(jīng)退行性疾病的神經(jīng)保護(hù)研究中，它能通過(guò)抑制淀粉樣蛋白聚集、減少神經(jīng)炎癥等，也可輔助緩解部分疼痛，同時(shí)作為手性中間體用于含氟手性化合物合成。

新制備方法

(R)-氟比洛芬有多種制備方法，可從外消旋氟比洛芬采用動(dòng)力學(xué)動(dòng)態(tài)拆分及其它化學(xué)拆分方法。與這些方法相比，酶法拆分條件溫和且立體選擇性高。最常用的是酯水解酶，包括脂肪酶和酯酶。利用該固定化重組酶制備光學(xué)純度大于99%的(R)-氟比洛芬，為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

(R)-氟比洛芬的制備首先是酶的合成，采用來(lái)源于芽孢菌屬(Bacillus sp.)的酯水解酶(E.C.3.1.1.3)。酯水解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)pBSEST-PET，該宿主菌表達(dá)產(chǎn)物的N-端融合了6個(gè)組氨酸(His)殘基。發(fā)酵培養(yǎng)基/g·L-1:葡萄糖10，酵母抽提物10，胰蛋白胨10，K2HPO4·3H2O 3，KH2PO45，(NH4)2SO4 1.7，pH7.0。取甘油管保存的菌液，涂布含氨芐青霉素(Amp)100μg/ml的固體LB平板，37℃靜置培養(yǎng)12 h。挑取單菌落，接種于裝有LB液體培養(yǎng)基400ml(含Amp 100μg/ml)的3L搖瓶中，37℃振蕩(250r/min)培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液接種于15L發(fā)酵培養(yǎng)基，10h后加入IPTG至終濃度0.2mmol/L誘導(dǎo)4h。將發(fā)酵液離心(18800×g)15min，得到濕菌體350g。用20mmol/L磷酸鈉緩沖液(pH9.0)1.5L重新懸浮菌體，經(jīng)15000psi高壓均質(zhì)2次，破壁液中酯酶酶活力為45.2u/ml。

手性拆分及純化

取細(xì)胞破壁液一步純化固定化酶50g，加入20mmol/L磷酸鈉緩沖液(pH9.0)500ml、氟比洛芬乙酯8.0g、Tween-80 50μl，45℃攪拌(250r/min)下反應(yīng)。期間滴加1mol/L氫氧化鈉溶液保持pH9.0，每隔一段時(shí)間取樣檢測(cè)濃度變化，當(dāng)拆分率大于80%時(shí)反應(yīng)液經(jīng)400目濾網(wǎng)過(guò)濾，固定化酶經(jīng)20mmol/L磷酸鈉緩沖液(pH9.0)50ml洗滌后，繼續(xù)用于下一批反應(yīng)。取上述4批反應(yīng)液離心(18800×g)30min去除固體物質(zhì)，經(jīng)乙酸乙酯洗滌。萃余液調(diào)至pH2.5，4℃放置過(guò)夜，過(guò)濾得到(R)-氟比洛芬粗品，70℃重新溶解于正己烷中，過(guò)濾去除不溶物，室溫冷卻4h后過(guò)濾得到針狀晶體7.58g，收率為30.7%，拆分收率為60%。(R)-氟比洛芬的含量為99.97%，光學(xué)純度為99.6%[1]。

參考文獻(xiàn)

[1]楊仲毅,陳少欣,徐期,等.利用固定化酯酶制備(R)-氟比洛芬[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2008,(02):99-100+112.