簡介

多肽試劑TOTU為白色至類白色針狀或顆粒狀結(jié)晶，熔點(diǎn) 125–130 °C（分解），幾乎無嗅。其晶體結(jié)構(gòu)以脲鎓陽離子為核心：中心季銨化的 N,N,N′,N′-四甲基脲鎓骨架通過 N=C 鍵與活性離去基團(tuán)“乙氧羰基氰基亞甲胺”相連，形成共軛吸電子體系；配對陰離子為四氟硼酸根 BF??，整體呈離子型鹽，易溶于乙腈、DMF、DMSO等極性非質(zhì)子溶劑，微溶于二氯甲烷，不溶于水與烷烴。該結(jié)構(gòu)賦予多肽試劑TOTU強(qiáng)大的羧酸活化能力[1]，同時(shí)避免了傳統(tǒng)HOBt/HOAt類試劑潛在的爆炸性副產(chǎn)物，是目前最常用的高收率、低外消旋肽偶聯(lián)活化劑之一。

圖1 多肽試劑TOTU的性狀

合成

哌啶在DMF中除去剩余的Fmoc基團(tuán)。然后用DMF、二氯甲烷、異丙醇和甲基叔胺洗滌樹脂。丁醚，然后真空干燥。在1.42 ml二氯甲烷中加入0.9 ml間甲酚，然后加入14 ml三氟乙酸和1 ml三甲基硅基溴，將肽從樹脂中分離出來。2.5 h后，將混合物濾入200 ml冷甲基叔丁醚中。將沉淀的固體過濾掉，然后溶解在水中，用乙酸乙酯提取水溶液以去除清除劑。然后用離子交換樹脂Dowex IRA 93（醋酸形式）處理水溶液，過濾和凍干。粗肽（267 mg）經(jīng)Sephadex LH 20柱層析純化得到標(biāo)題化合物多肽試劑TOTU[2]。

保存方法

TOTU對水分與溫度極為敏感，必須全程在干燥惰性氣氛下保存。長期儲存應(yīng)置于–20 °C冷凍冰箱，瓶內(nèi)預(yù)置4?分子篩或變色硅膠，瓶口先用聚四氟乙烯內(nèi)襯螺旋蓋旋緊，再外包兩層Parafilm，最后放入鋁箔袋抽真空封合，以隔絕濕氣和光照。日常使用時(shí)，提前將整瓶置于室溫干燥器內(nèi)平衡十分鐘，立即在手套箱或干燥氮?dú)饬飨路Q取所需量，剩余試劑迅速回封并放回–20 °C，避免反復(fù)凍融。

參考文獻(xiàn)

[1] National Center for Biotechnology Information. "PubChem Compound Summary for CID 2733286, O-[(Ethoxycarbonyl)cyanomethylenamino]-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate" PubChem, https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/totu. Accessed 13 August, 2025.

[2] Current Patent Assignee: sanofi aventis deutschland- US5166394, 1992, A.