研究背景
霍亂毒素（Cholera Toxin）源于霍亂弧菌，由A、B兩種亞基組成。A亞基是一種ADP-核糖轉移酶，通過破壞G蛋白信號傳導致使細胞脫水。而霍亂毒素B亞基 (2-8℃)（Cholera Toxin Subunit B，CTB) 通過與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的戊多糖鏈結合附于細胞表面，可被軸突末端吸收并逆向運輸至胞體，進而特異高效地逆行標記神經(jīng)細胞，目前常被用作無毒逆行示蹤劑。此外，該物質具有良好免疫佐劑活性，黏膜途徑免疫其效果更佳[1]。特別地，霍亂毒素B亞基 (2-8℃)能作為誘導口服耐受強大的黏膜運載系統(tǒng)，還可以有效地減少自身抗原在口服時劑量，這些都暗示其耦聯(lián)自身抗原不僅使口服耐受防治Ⅰ型糖尿病等自身免疫性疾病更具有實際應用價值，還具有潛在的治療前景[2]。
制備方法
生物技術制藥工程公開了一種霍亂毒素B亞基 (2-8℃)的制法。該方法通過家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)(Bombyx mori Nuclear polyhedrosis Virus)重組帶有CTB基因，獲得重組病毒。將該重組病毒接種家蠶幼蟲，蛹進行表達，經(jīng)分離純化，冷凍干燥，制成口服藥物，經(jīng)動物試驗，在小鼠體內產(chǎn)生較強的抗體。以家蠶幼蟲，蛹中表達CTB作為佐劑能顯著增強rHBsAg，丙肝抗原，IBDV VP2抗原的口服免疫效果，顯著增強胰島素，rhGM-SCF口服治療效果，成為一種制備抗霍亂菌藥物和佐劑的新型方法。與現(xiàn)有技術相比，上述制備霍亂毒素B亞基 (2-8℃)的方法原料易得，生產(chǎn)成本低，治療效果良好，具有十分重大的市場開發(fā)應用前景[3]。
應用
無機材料結合生物大分子的技術領域公開了一種Fe3O4@SiO2與霍亂毒素B亞基 (2-8℃)的偶聯(lián)方法。首先，用SiO2在表面修飾Fe3O4，再通過偶聯(lián)劑APTES和NHS、EDC·HCl，將修飾后的Fe3O4與霍亂毒素B亞基 (2-8℃)偶聯(lián)，能有效將二者結合起來，制備得到一種具有較好生物相容性的T2造影劑[4]。
此外，文獻還報道了一種幽門螺旋桿菌多表位疫苗，其活性成分是一條多肽，主要由幽門螺旋桿菌尿素酶A，B雙亞基的Th和B細胞抗原表位的多拷貝體以及黏膜免疫佐劑霍亂毒素B亞基 (2-8℃)構成。具體地，通過基因合成技術合成一個人工基因，其包含有尿素酶A，B雙亞基的Th和B細胞抗原表位多拷貝體的基因序列；然后將該人工基因與霍亂毒素B亞基 (2-8℃)的基因序列相偶聯(lián)，形成一個融合基因。利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達該融合基因，經(jīng)蛋白純化后，獲得幽門螺旋桿菌多表位疫苗。該幽門螺旋桿菌多表位疫苗能夠誘發(fā)機體產(chǎn)生針對尿素酶A，B雙亞基的T細胞免疫應答和高滴度特異性抗體體液免疫應答，可用于預防和治療幽門螺旋桿菌感染相關性疾病[5]。
有關研究
對以霍亂毒素B亞基為載體蛋白的重組瘧疾多價抗原在小鼠及恒河猴 中的免疫原性及對相應瘧原蟲感染的免疫保護作用進行研究。結果表明：該抗原免疫小鼠后，對約氏瘧子孢子攻擊的保護率在50%左右。恒河猴免疫后用 1×108食蟹瘧裂殖子攻擊，對照組2只動物在攻擊后4d感染，感染持續(xù)30d以上。免疫組2只動物中，兩只動物在感染6～7d后完全恢復，且1只推遲 3d感染，說明該抗原具有免疫保護作用[6]。
此外，在A組輪狀病毒VP6與霍亂毒素B亞基 (2-8℃)融合蛋白在大腸桿菌中的表達及生物活性分析研究中，利用霍亂毒素B亞基 (2-8℃)的免疫載體作用，將輪狀病毒相關抗原引入口服免疫體系，可激起有效的粘膜免疫反應。其中，霍亂毒素B亞基 (2-8℃)基因與A組輪狀病毒地方株T114VP6全基因的融合，并在大腸桿菌BL2 1(DE3 )中進行了融合蛋白的表達[7]。
參考文獻
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[3]金勇豐,張耀洲,吳祥甫.霍亂毒素b亞基的制法:CN01144502.5[P].
[4]王華倩,楊靜茹,紀美琪,等.一種四氧化三鐵與霍亂毒素B亞基偶聯(lián)的制備方法及其應用:CN202110947328.4[P].
[5]奚濤,郭樂,邢瑩瑩,等.一種新型幽門螺旋桿菌多表位疫苗及其制備方法:CN201110064596.8[P].
[6]曹誠,李平,石成華,等.重組霍亂毒素B亞基與瘧原蟲多表位融合蛋白的免疫保護作用研究[J].生物工程學報, 2000, 16(003):333-336.DOI:10.1007/BF02983442.
[7]郭婷夏,方榮祥,李國華,等.A組輪狀病毒VP6與霍亂毒素B亞基融合蛋白在大腸桿菌中的表達及生物活性分析[J].生物工程學報, 2001, 17(6):5.DOI:10.3321/j.issn:1000-3061.2001.06.006.